[發明專利]檢測流感病毒H5、H7、H9亞型的引物和探針及其應用、試劑和數字PCR試劑盒

在審

• 申請號: 202210770639.2
• 申請日: 2022-06-30
• 公開（公告）號: CN114959121A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 周鑫鑫;田星;王虹軍;陳芝娟;賀賢漢
• 申請（專利權）人: 杭州博日科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 張金銘

本發明提供了一種檢測流感病毒H5、H7、H9亞型的引物和探針及其應用、試劑和數字PCR試劑盒，涉及生物技術領域。本發明提供的檢測流感病毒H5、H7、H9亞型的引物和探針，其中引物具有如SEQ ID NO.1?6所示的核酸序列，探針具有如SEQ ID NO.7?9所示的核酸序列，該引物和探針特異性強，靈敏度高，能夠用于制備檢測流感病毒H5、H7、H9亞型的產品，實現對流感病毒H5、H7、H9亞型的檢測。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是涉及一種檢測流感病毒H5、H7、H9亞型的引物和探針及其應用、試劑和數字PCR試劑盒。

背景技術

流感病毒(Influenza virus)在病毒分類學上屬于正粘病毒科。主要通過空氣中的飛沫、易感者與感染者之間的接觸或與被污染物品的接觸而傳播，一般秋冬季節是其高發期。流感病毒包括人流感病毒和動物流感病毒，人流感病毒分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，是流感的病原體。其中甲型流感病毒抗原性易發生變異，可以進一步分為H1N1、H5N1、H7N9等亞型，其中的H和N分別代表流感病毒兩種表面糖蛋白。至今發現能直接感染人的禽流感病毒亞型有：H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H9N2和H7N9亞型。根據禽流感病毒致病性和毒力的不同，可以將禽流感分為高致病性禽流感、低致病性禽流感和無致病性禽流感。高致病性禽流感目前有H5N1亞型和H7N9亞型尤為引人關注，不僅造成了人類的傷亡，同時重創了家禽養殖業。

現有流感病毒檢測方法包括分子診斷和免疫診斷兩大方面。分子診斷技術包括反轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)，環介導等溫核酸擴增技術(LAMP)，核酸分子雜交，數字PCR，基因芯片等。免疫診斷技術包括酶聯免疫(ELISA)，熒光免疫，化學發光，膠體金等。

數字PCR比傳統的RT-PCR具有更高的靈敏度和準確性，最低能夠檢測出單個拷貝數的樣本。通過對核酸隨機分配到大量的反應單元中進行擴增反應，擴增結束后對每個反應單元的熒光信號進行采集，最后通過直接計數或泊松分布公式計算得到樣品的原始濃度或含量的PCR技術。然而目前還缺少一種能夠同時實現對流感病毒H5、H7、H9亞型檢測且適用于微滴數字PCR的試劑盒。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種檢測流感病毒H5、H7、H9亞型的引物和探針，以解決上述問題中的至少一種。

本發明的第二目的在于提供上述引物和探針在制備流感病毒H5、H7、H9亞型檢測產品中的應用。

本發明的第三目的在于提供一種試劑。

本發明的第四目的在于提供一種數字PCR試劑盒。

第一方面，本發明提供了一種檢測流感病毒H5、H7、H9亞型的引物和探針，所述引物包括第一引物對、第二引物對和第三引物對；

所述第一引物對具有如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核酸序列；所述第二引物對具有如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核酸序列；所述第三引物對具有如SEQ IDNO.5和SEQ ID NO.6所示的核酸序列；

所述探針包括第一探針、第二探針和第三探針；

所述第一探針具有如SEQ ID NO.7所示的核酸序列；所述第二探針具有如SEQ IDNO.8所示的核酸序列；所述第三探針具有如SEQ ID NO.9所示的核酸序列。

作為進一步技術方案，所述探針的5’端連接有熒光報告基團，3’端連接有熒光淬滅基團。

作為進一步技術方案，所述熒光報告基團包括FAM、CY5或HEX；

優選地，所述熒光淬滅基團包括TAMRA、BHQ1或BHQ2。