[發(fā)明專利]一種定性檢測母乳中酸性低聚糖的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210757416.2
• 申請日: 2022-06-30
• 公開（公告）號: CN115112799B
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳歷俊;張明輝;喬為倉;趙軍英;賈舸;王亞玲;劉妍;陳璟瑤;劉茜;楊寶雨;楊軼涵
• 申請（專利權(quán)）人: 北京三元食品股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/60;G01N30/72
• 代理公司: 北京悅和知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11714
• 代理人: 司麗春

1.一種定性檢測母乳中酸性低聚糖的方法，其特征在于，依次按下述步驟進(jìn)行：

（1）將母乳離心，去除上層脂肪和蛋白質(zhì)，取離心產(chǎn)物的中間層；

（2）加入乙醇，靜置反應(yīng)；

（3）離心，取上清；

（4）利用層析柱吸附，先用超純水水洗，后用氯化鈉溶液洗脫，收集洗脫液；所使用的層析柱為Cleanert IC-A，且在吸附前經(jīng)超純水活化；

（5）將洗脫液通過液質(zhì)聯(lián)用進(jìn)行分析，液質(zhì)聯(lián)用的液相色譜的參數(shù)為分析柱 DionexIonPac^TMAS19 2×250mm，保護(hù)柱Dionex IonPac^TMAG19 2×50mm，電化學(xué)檢測器，柱溫：35℃；流動相A：超純水，流動相D：50mmol/L NaOH溶液；抑制器電流：495mA，流速：2mL/min；洗脫條件：0-2min，95% A和5% D；25min時，80% A和20% D；45min時，70% A和30% D；45.1min時，95% A和5% D，液質(zhì)聯(lián)用的質(zhì)譜的參數(shù)為：采用Q Exactive檢測器進(jìn)行檢測，使用電噴霧離子源，噴霧電壓為3.5kV，鞘氣壓力為35arb，輔氣壓力為10arb，加熱溫度為350℃，毛細(xì)管溫度為320℃，碰撞能量為30V，在負(fù)離子模式下對550-2000 m/z的物質(zhì)進(jìn)行Full MS/dd-MS²模式掃描。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定性檢測母乳中酸性低聚糖的方法，其特征在于，步驟（1）中離心的具體條件為3-5℃下8000-10000rpm離心25-35min。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的定性檢測母乳中酸性低聚糖的方法，其特征在于，離心條件為4℃下10000rpm離心30min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定性檢測母乳中酸性低聚糖的方法，其特征在于，步驟（2）中，加入乙醇的體積與步驟（1）中獲得的中間層產(chǎn)物的體積比為2-3:1。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的定性檢測母乳中酸性低聚糖的方法，其特征在于，步驟（2）中，加入乙醇的體積與步驟（1）中獲得的中間層產(chǎn)物的體積比為2:1。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定性檢測母乳中酸性低聚糖的方法，其特征在于，步驟（2）中，靜置反應(yīng)的環(huán)境溫度為零下17-零下23℃，反應(yīng)時間為25-35min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定性檢測母乳中酸性低聚糖的方法，其特征在于，步驟（2）中，靜置反應(yīng)的環(huán)境溫度為零下20℃，反應(yīng)時間為30min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定性檢測母乳中酸性低聚糖的方法，其特征在于，步驟（3）中，離心的具體條件為3-5℃下3000-5000g離心25-35min。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的定性檢測母乳中酸性低聚糖的方法，其特征在于，步驟（3）中，離心條件為4℃下4000g離心30min。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的定性檢測母乳中酸性低聚糖的方法，其特征在于，步驟（4）中，所用的氯化鈉溶液的濃度為40-60mmol/L。