[發(fā)明專利]一種多糖及在腫瘤細(xì)胞免疫治療中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210725878.6
• 申請(qǐng)日: 2022-06-23
• 公開（公告）號(hào): CN114957503B
• 公開（公告）日: 2023-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙玲玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中科中鑾生物科技（廣東）有限公司
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00;C12N5/0783
• 代理公司: 蕪湖宸澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 34208
• 代理人: 李俊建

本發(fā)明公開了一種多糖及在腫瘤細(xì)胞免疫治療中的應(yīng)用。本發(fā)明從血耳中分離得到一種分子量不同于現(xiàn)有技術(shù)中TSP?II多糖的均一多糖TSP?X，活性研究發(fā)現(xiàn)該多糖具有促進(jìn)NK細(xì)胞增殖的作用，且不會(huì)降低NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷力。因此，本發(fā)明提供的血耳均一多糖TSP?X可以用于擴(kuò)增NK細(xì)胞進(jìn)而用于細(xì)胞免疫治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫細(xì)胞治療領(lǐng)域，尤其涉及一種多糖及在腫瘤細(xì)胞免疫治療中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

自然殺傷(NK)細(xì)胞是機(jī)體抵抗病原微生物感染及清理自身癌變細(xì)胞的重要固有免疫細(xì)胞。NK細(xì)胞的功能受抑制型受體和活化型受體介導(dǎo)的信號(hào)強(qiáng)度之間的平衡來(lái)調(diào)節(jié)，活化后的NK細(xì)胞可直接殺傷靶細(xì)胞，也可以分泌細(xì)胞因子和炎性因子參與免疫調(diào)節(jié)。近年來(lái)，基于NK細(xì)胞免疫功能的抗腫瘤免疫療法成為腫瘤治療的新興熱門領(lǐng)域。

將NK細(xì)胞用于免疫細(xì)胞治療首先要解決的問(wèn)題就是如何獲得大量NK細(xì)胞進(jìn)而輸入人體。因此，對(duì)NK細(xì)胞增殖能力提高的研究一直沒有松懈。

多糖的一級(jí)結(jié)構(gòu)由單糖通過(guò)糖苷鍵連接而成，一級(jí)結(jié)構(gòu)再通過(guò)范德華力等作用力形成高級(jí)結(jié)構(gòu)，多變的一級(jí)結(jié)構(gòu)和高級(jí)結(jié)構(gòu)決定了不同多糖可以形成不同的結(jié)構(gòu)域，這些不同的結(jié)構(gòu)域讓不同多糖產(chǎn)生了不同的、豐度的生物活性。

多糖在免疫領(lǐng)域也早有應(yīng)用，開發(fā)更多活性多糖也是細(xì)胞免疫領(lǐng)域研究的重要方向。

銀耳屬真菌作為重要的食用真菌之一，在中國(guó)境內(nèi)廣泛存在。常見銀耳屬的可食用真菌主要有銀耳、腦耳、金耳和血耳。銀耳屬多糖具有多種生物活性，如抗腫瘤，免疫調(diào)節(jié)，降血糖，抗氧化，降血脂和抗血栓等，銀耳屬多糖因此受到廣泛關(guān)注。血耳(Tremellasanguinea?Peng)隸屬銀耳科(Treimellaceae)、銀耳屬(Tremella)，相較于銀耳屬其它多糖，目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)血耳多糖的研究報(bào)道較少。王昭晶等從血耳中分離得到一種均一多糖TSP-II，并發(fā)現(xiàn)該多糖具有抗炎活性(血耳多糖的提取工藝、微觀結(jié)構(gòu)及其抗炎癥作用，中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2019年1月)。最新研究表明，血耳總多糖可以顯著促進(jìn)小鼠巨噬細(xì)胞的增殖(血耳多糖對(duì)小鼠Raw264.7巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用研究，農(nóng)產(chǎn)品加工，2022年4月)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種多糖及在腫瘤細(xì)胞免疫治療中的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

一種多糖，通過(guò)如下步驟制備：

取適量血耳，加入蒸餾水，沸水浴提取，過(guò)濾收集濾液，減壓濃縮、冷卻、離心，離心條件為3500r/min離心10min；取上清液，加入4倍體積無(wú)水乙醇沉淀、離心，離心條件為3500r/min離心10min；收集沉淀得血耳總多糖，Sevag法脫蛋白；

取脫蛋白的血耳總多糖，用蒸餾水配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％的糖液，緩慢加入硫酸銨，使得硫酸銨的濃度達(dá)到30mg/mL，靜置12h，5000r/min離心20min，收集濾液；濾液繼續(xù)緩慢加入硫酸銨，使得硫酸銨的濃度達(dá)到50mg/mL，靜置12h，5000r/min離心20min，收集沉淀；蒸餾水復(fù)溶，用截留分子量3500u的透析袋透析，冷凍干燥得分級(jí)多糖；

取分級(jí)多糖，用蒸餾水配制成20mg/mL的糖液，3500r/min離心10min，取20mL上清液上樣于內(nèi)徑2.5cm、柱床高度30cm的Sephadex?G-100葡聚糖凝膠層析柱，蒸餾水洗脫，流速為2mL/min，10mL收集1管并從1開始按順序編號(hào)，每管取少量進(jìn)行苯酚-硫酸顯色測(cè)定OD490nm吸光度值，以管號(hào)為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制洗脫曲線，合并洗脫曲線主峰對(duì)應(yīng)編號(hào)12～20的收集管中的洗脫液，合并，冷凍干燥即得。