[發明專利]一種多糖及在腫瘤細胞免疫治療中的應用

有效

• 申請號: 202210725878.6
• 申請日: 2022-06-23
• 公開（公告）號: CN114957503B
• 公開（公告）日: 2023-09-08
• 發明（設計）人: 趙玲玲
• 申請（專利權）人: 中科中鑾生物科技（廣東）有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;C12N5/0783
• 代理公司: 蕪湖宸澤知識產權代理事務所(普通合伙) 34208
• 代理人: 李俊建

1.一種多糖用于NK細胞體外培養促進其體外增殖的用途，該多糖通過如下步驟制備：

取適量血耳，加入蒸餾水，沸水浴提取，過濾收集濾液，減壓濃縮、冷卻、離心，離心條件為3500r/min離心10min；取上清液，加入4倍體積無水乙醇沉淀、離心，離心條件為3500r/min離心10min；收集沉淀得血耳總多糖，Sevag法脫蛋白；

取脫蛋白的血耳總多糖，用蒸餾水配制成質量分數為5%的糖液，緩慢加入硫酸銨，使得硫酸銨的濃度達到30mg/mL，靜置12h，5000r/min離心20min，收集濾液；濾液繼續緩慢加入硫酸銨，使得硫酸銨的濃度達到50mg/mL，靜置12h，5000r/min離心20min，收集沉淀；蒸餾水復溶，用截留分子量3500u的透析袋透析，冷凍干燥得分級多糖；

取分級多糖，用蒸餾水配制成20mg/mL的糖液，3500r/min離心10min，取20mL上清液上樣于內徑2.5cm、柱床高度30cm的Sephadex?G-100葡聚糖凝膠層析柱，蒸餾水洗脫，流速為2mL/min，10mL收集1管并從1開始按順序編號，每管取少量進行苯酚-硫酸顯色測定OD490nm吸光度值，以管號為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制洗脫曲線，將洗脫曲線主峰對應編號12~20的收集管中的洗脫液合并，冷凍干燥即得。

2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，Sevag法脫蛋白的具體步驟為：取血耳總多糖，用蒸餾水配制成質量分數為5%的糖液進行Sevag法脫蛋白，將糖液與Sevag試劑按體積比4:1混合，充分振蕩，3500r/min離心10min，分液漏斗回收上層糖液；反復脫蛋白直至無固體蛋白層為止，將脫蛋白后的糖液冷凍干燥。

3.根據權利要求2所述的用途，其特征在于：所述Sevag試劑為氯仿和正丁醇按體積比4:1混合制備而成。