[發(fā)明專利]一種瘀阻腦絡(luò)證顱內(nèi)動(dòng)脈血管延長擴(kuò)張動(dòng)脈模型的構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210721992.1
• 申請(qǐng)日: 2022-06-17
• 公開（公告）號(hào): CN115067278B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張道培;劉飛祥;張懷亮;牛玉閣;李丹;王理想;馬艷敏;楊銀夢(mèng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): A01K67/027
• 分類號(hào): A01K67/027
• 代理公司: 蕪湖思誠知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34138
• 代理人: 宦曉軍

本發(fā)明公開了一種瘀阻腦絡(luò)證顱內(nèi)動(dòng)脈血管延長擴(kuò)張動(dòng)脈模型的構(gòu)建方法，本發(fā)明公開了一種顱內(nèi)動(dòng)脈延長擴(kuò)張癥(IADE)動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，屬于動(dòng)物模型構(gòu)建技術(shù)領(lǐng)域，其包括以下步驟：1)通過小鼠枕大池注射2.5mU彈性蛋白酶的手術(shù)，構(gòu)建顱內(nèi)動(dòng)脈延長擴(kuò)張癥動(dòng)物模型；2)小鼠枕大池注射彈性蛋白酶手術(shù)2周后，通過血管造影技術(shù)，觀察小鼠顱底動(dòng)脈迂曲、延長、擴(kuò)張的情況。本發(fā)明構(gòu)建的IADE動(dòng)物模型有利于闡釋IADE的病理機(jī)制、藥物的研發(fā)和IADE的防治。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動(dòng)物模型構(gòu)建技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種顱內(nèi)動(dòng)脈延長擴(kuò)張癥動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

顱內(nèi)動(dòng)脈延長擴(kuò)張癥(IADE)是一種以椎、基底、大腦中、交通動(dòng)脈的延長、擴(kuò)張和彎曲為主要特征，以管壁中膜的內(nèi)彈力層破壞、肌層萎縮和結(jié)締組織的透明樣變?yōu)橹饕±碜兓暮笱h(huán)疑難腦血管病。IADE的致殘率和致死率較高，嚴(yán)重影響了患者的生命安全和生活質(zhì)量，給社會(huì)帶了沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。根據(jù)Wolters等人的調(diào)查顯示，IADE在卒中患者中發(fā)生率高達(dá)3％-17％，患者5年內(nèi)腦梗死的發(fā)生率為17.6％，腦出血的發(fā)生率為4.7％，出現(xiàn)并發(fā)癥后5年內(nèi)死亡風(fēng)險(xiǎn)高達(dá)36.2％。IADE臨床報(bào)道較多，但目前尚缺乏有效的特異性治療藥物和手段，且用于基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究的動(dòng)物模型欠缺，因而造成基礎(chǔ)研究的困難與滯后。

目前國內(nèi)對(duì)該模型的復(fù)制研究尚處于探索階段，本研究根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，結(jié)合摸索的條件，通過小鼠小腦枕大池注射彈性蛋白酶的方法，建立IADE動(dòng)物模型，探討本病的發(fā)病機(jī)制與特點(diǎn)，以期為相關(guān)藥物防治IADE的實(shí)驗(yàn)研究提供可靠的動(dòng)物模型。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題：提供一種IADE動(dòng)物模型的建立方法，解決現(xiàn)有顱內(nèi)動(dòng)脈延長擴(kuò)張癥研究模型缺乏的問題。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供以下的技術(shù)方案：

一種瘀阻腦絡(luò)證顱內(nèi)動(dòng)脈血管延長擴(kuò)張動(dòng)脈模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：通過小鼠枕大池注射彈性蛋白酶手術(shù)構(gòu)建得到顱內(nèi)動(dòng)脈延長擴(kuò)張癥動(dòng)物模型，在其手術(shù)2周后，對(duì)小鼠腦血管組織造影，分離腦組織后拍照記錄圖像，用于觀察小鼠顱底動(dòng)脈迂曲、延長、擴(kuò)張的情況。

優(yōu)選地，所述小鼠枕大池注射彈性蛋白酶手術(shù)的具體步驟如下：

1)小鼠實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)飼養(yǎng)后麻醉；

2)剃去頸部鼠毛以備皮，并將小鼠固定在腦立體定位儀上，下層鋪無菌單，備皮處碘伏消毒，75％酒精脫碘；

3)沿枕骨下正中線開適當(dāng)切口，然后沿著頸部白線剪開肌肉層，接著用解剖鑷子分離附著在枕骨大孔的肌肉以暴露白色的硬脊膜層；

4)穩(wěn)持微量注射器，以大腦中線，枕骨大孔的水平線交點(diǎn)為進(jìn)針點(diǎn)，緩慢刺入枕骨大孔1mm的深度；

5)回抽腦脊液，當(dāng)有腦脊液被回抽出時(shí)，表明進(jìn)入小腦枕大池的位置正確，當(dāng)回抽空泡或抽取不到腦脊液時(shí)，表明位置進(jìn)入錯(cuò)誤，不可注射，需要重新進(jìn)針；

6)緩慢注射2.5μL含有25mU的彈性蛋白酶，在拔出注射器的同時(shí)，立刻用棉簽輕輕按壓，防止藥液及腦脊液流出；

7)縫合傷口后注射抗生素預(yù)防感染；

8)術(shù)后注意37℃恒溫保暖，每日檢查動(dòng)物傷口及狀態(tài)，防止動(dòng)物相互撕咬傷口。

優(yōu)選地，所述步驟(1)具體為：實(shí)驗(yàn)室環(huán)境飼養(yǎng)一周，術(shù)前禁食禁水8h；按照1mL/min的流量，經(jīng)小鼠呼吸道進(jìn)行異氟烷空氣麻醉。

優(yōu)選地，所述步驟(2)中腦立體定位儀的固定參數(shù)：前高14-15cm，左右耳錐高15-16cm，左右耳錐寬度5-7cm；小鼠頭部與平面平行，與身體呈110-120°，耳椎固定位置為小鼠耳前顳骨處。