[發(fā)明專利]一種瘀阻腦絡(luò)證顱內(nèi)動(dòng)脈血管延長(zhǎng)擴(kuò)張動(dòng)脈模型的構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210721992.1
• 申請(qǐng)日: 2022-06-17
• 公開（公告）號(hào): CN115067278B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張道培;劉飛祥;張懷亮;牛玉閣;李丹;王理想;馬艷敏;楊銀夢(mèng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): A01K67/027
• 分類號(hào): A01K67/027
• 代理公司: 蕪湖思誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34138
• 代理人: 宦曉軍

1.一種瘀阻腦絡(luò)證顱內(nèi)動(dòng)脈血管延長(zhǎng)擴(kuò)張動(dòng)脈模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：通過小鼠枕大池注射彈性蛋白酶手術(shù)構(gòu)建得到顱內(nèi)動(dòng)脈延長(zhǎng)擴(kuò)張癥動(dòng)物模型，在其手術(shù)2周后，對(duì)小鼠腦血管組織造影，分離腦組織后拍照記錄圖像，用于觀察小鼠顱底動(dòng)脈迂曲、延長(zhǎng)、擴(kuò)張的情況；所述小鼠枕大池注射彈性蛋白酶手術(shù)的具體步驟如下：

1)小鼠實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)飼養(yǎng)后麻醉；

2)剃去頸部鼠毛以備皮，并將小鼠固定在腦立體定位儀上，下層鋪無菌單，備皮處碘伏消毒，75％酒精脫碘；

3)沿枕骨下正中線開適當(dāng)切口，然后沿著頸部白線剪開肌肉層，接著用解剖鑷子分離附著在枕骨大孔的肌肉以暴露白色的硬脊膜層；

4)穩(wěn)持微量注射器，以大腦中線，枕骨大孔的水平線交點(diǎn)為進(jìn)針點(diǎn)，緩慢刺入枕骨大孔1mm的深度；

5)回抽腦脊液，當(dāng)有腦脊液被回抽出時(shí)，表明進(jìn)入小腦枕大池的位置正確，當(dāng)回抽空泡或抽取不到腦脊液時(shí)，表明位置進(jìn)入錯(cuò)誤，不可注射，需要重新進(jìn)針；

6)緩慢注射2.5μL含有25mU的彈性蛋白酶，在拔出注射器的同時(shí)，立刻用棉簽輕輕按壓，防止藥液及腦脊液流出；

7)縫合傷口后注射抗生素預(yù)防感染；

8)術(shù)后注意37℃恒溫保暖，每日檢查動(dòng)物傷口及狀態(tài)，防止動(dòng)物相互撕咬傷口。

2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的一種瘀阻腦絡(luò)證顱內(nèi)動(dòng)脈血管延長(zhǎng)擴(kuò)張動(dòng)脈模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述步驟1)具體為：實(shí)驗(yàn)室環(huán)境飼養(yǎng)一周，術(shù)前禁食禁水8h；按照1mL/min的流量，經(jīng)小鼠呼吸道進(jìn)行異氟烷空氣麻醉。

3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的一種瘀阻腦絡(luò)證顱內(nèi)動(dòng)脈血管延長(zhǎng)擴(kuò)張動(dòng)脈模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述步驟2)中腦立體定位儀的固定參數(shù)：前高14-15cm，左右耳錐高15-16cm，左右耳錐寬度5-7cm；小鼠頭部與平面平行，與身體呈110-120°，耳椎固定位置為小鼠耳前顳骨處。

4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的一種瘀阻腦絡(luò)證顱內(nèi)動(dòng)脈血管延長(zhǎng)擴(kuò)張動(dòng)脈模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述步驟7)中采用6-0可吸收性外科縫線依次進(jìn)行肌肉層、筋膜層、皮層縫合，碘伏傷口處消毒，外用青霉素G鈉預(yù)防感染。

5.根據(jù)權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述一種瘀阻腦絡(luò)證顱內(nèi)動(dòng)脈血管延長(zhǎng)擴(kuò)張動(dòng)脈模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述腦血管組織造影方法為：造模14天后，小鼠在10％水合氯醛腹腔注射下麻醉，剪開胸腔，先以生理鹽水20mL灌注，將血液置換，接著以4％多聚甲醛進(jìn)行組織固定，最后再用配好的FlowTechMICROFIL血管造影劑3mL進(jìn)行腦血管組織造影。

6.根據(jù)權(quán)利要求5中所述一種瘀阻腦絡(luò)證顱內(nèi)動(dòng)脈血管延長(zhǎng)擴(kuò)張動(dòng)脈模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述分離腦組織后拍照記錄圖像的方法為：將腦血管組織造影后的小鼠置于4℃冰箱中固定一夜，隨后在解剖顯微鏡下行開顱術(shù)和硬脊膜切開術(shù)，將大腦半球從皮質(zhì)表面上部分離，將腦組織沿著大腦血管網(wǎng)仔細(xì)地從顱腔內(nèi)分離出來；然后進(jìn)行拍照，并用Q-Capture Pro7軟件進(jìn)行捕獲圖像，計(jì)算基底動(dòng)脈血管迂曲指數(shù)和動(dòng)脈直徑增加百分比。