[發明專利]PCR擴增引物對及其應用

在審

• 申請號: 202210706287.4
• 申請日: 2022-06-21
• 公開（公告）號: CN114990242A
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發明（設計）人: 張鳳;祁騰;張清平;王靜;唐甜;舒希;朱旭
• 申請（專利權）人: 重慶市天友乳業股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/07
• 代理公司: 重慶西南華渝專利代理有限公司 50270
• 代理人: 馮曉超

1.PCR擴增引物對，其特征在于，上游引物包含如SEQ ID NO：1所示序列，下游引物包含如SEQ ID NO：2所示序列。

2.檢測試劑，其特征在于，包括權利要求1所述的PCR擴增引物對。

3.根據權利要求2所述的檢測試劑，其特征在于，還包括標記試劑，標記試劑包括但不限于熒光染料或熒光探針。

4.檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的PCR擴增引物對或權利要求2至3中任一所述的檢測試劑。

5.權利要求1所述的PCR擴增引物對或權利要求2至3中任一所述的檢測試劑或權利要求4所述的檢測試劑盒在檢測耐熱芽孢桿菌中的應用。

6.耐熱芽孢桿菌的PCR擴增檢測方法，其特征在于，包括：將待檢測DNA模板使用權利要求1所述的PCR擴增引物對進行PCR擴增得PCR擴增產物，對PCR擴增產物進行分析，從而判斷待檢測DNA模板中是否含有耐熱芽孢桿菌。

7.耐熱芽孢桿菌的PCR擴增檢測方法，其特征在于，包括：待檢測DNA模板與權利要求3所述的檢測試劑混合后進行PCR擴增，在PCR擴增過程中，根據熒光信號判斷待檢測DNA模板中是否含有耐熱芽孢桿菌；根據CT值和標準曲線判斷待檢測DNA模板中耐熱芽孢桿菌的含量。

8.根據權利要求6或7所述的耐熱芽孢桿菌的PCR檢測方法，其特征在于，PCR擴增的退火溫度為56℃-60℃。

9.根據權利要求6或7所述的耐熱芽孢桿菌的PCR檢測方法，其特征在于，待檢測DNA模板濃度為：0.5μL/20μL＜待檢測DNA模板濃度＜2μL/20μL。

10.根據權利要求6或7所述的耐熱芽孢桿菌的PCR擴增檢測方法，其特征在于，耐熱芽孢桿菌為牛乳中耐熱芽孢桿菌，耐熱芽孢桿菌的PCR擴增檢測方法還包括在PCR擴增檢測前對待檢測牛乳進行前處理，其中，前處理包括：(1)將待檢測牛乳離心去除上清液和脂肪，過濾除盡牛乳；(2)使用無菌純水進行等體積重懸，離心保留上清液；(3)上清液在95℃-105℃進行金屬浴，速凍和凍融。