[發明專利]一種基于反轉錄轉座子鑒定沙子空心李種質的IRAP分子標記引物及其鑒定方法

在審

• 申請號: 202210693762.9
• 申請日: 2022-06-18
• 公開（公告）號: CN114854900A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 喬光;王貴;李蕊蕊;麥鵬坤
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 李亮;李龍

1.一種基于反轉錄轉座子鑒定沙子空心李種質的IRAP分子標記引物，其特征在于：所述的IRAP分子標記引物為Ty1-6、Ty1-7、Ty1-9、Ty1-15、Ty1-18、Ty1-20、Ty1-25、Ty3-2、Ty3-3、Ty3-5、Ty3-6、Ty3-9、Ty3-14及Ty3-16中的一種或一種以上混合。

2.根據權利要求1所述的一種基于反轉錄轉座子鑒定沙子空心李種質的IRAP分子標記引物的篩選方法，其特征在于：所述的IRAP分子標記，包括以下幾個步驟：

S1，提取供試沙子空心李幼嫩葉片基因組DNA；

S2，基于李反轉錄轉座子Ty1-copia和Ty3-gypsy的RT序列設計IRAP引物；

S3，取S1的DNA，經PCR反應擴增過后通過1.5％瓊脂糖凝膠電泳，對設計的引物進行初步篩選，保留具備多態性，條帶清晰的IRAP引物；

S4，利用初步篩選獲得的IRAP引物對所有供試材料進行IRAP分子標記分析，每個引物重復2-3次，根據擴增條帶的有無、多少及大小判定結果。

3.根據權利要求1所述的一種基于反轉錄轉座子鑒定沙子空心李種質的IRAP分子標記引物，其特征在于：S3中PCR反應最優體系為：30ng/μl模板DNA 1.0μl，引物1.3μl，PCR Mix5.0μl及2.7μlddH₂O。

4.根據權利要求1所述的一種基于反轉錄轉座子鑒定沙子空心李種質的IRAP分子標記引物，其特征在于：S3中所述的PCR反應程序為：94℃預變性4min，94℃變性30s，51℃-58℃退火30s，72℃延伸1min，共40次循環，72℃再反應10min，4℃保存。

5.根據權利要求1所述的一種基于反轉錄轉座子鑒定沙子空心李種質的IRAP分子標記引物，其特征在于：S1中所述幼嫩葉片是指葉齡15-20d新鮮或-80℃下保存的葉片。

6.根據權利要求1所述的一種基于反轉錄轉座子鑒定沙子空心李種質的IRAP分子標記引物，其特征在于：S3中PCR反應所使用的Mix包括0.4mM Taq DNA聚合酶、0.4mM dNTP、4mMMgCl₂及0.4mM常規緩沖液。