[發明專利]一種干化學競爭抑制發色底物法抗Xa活性檢測

在審

• 申請號: 202210675953.2
• 申請日: 2022-06-15
• 公開（公告）號: CN114965459A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 王平
• 申請（專利權）人: 上海貞元診斷用品科技有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31;G01N1/28;G01N1/38
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• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種干化學競爭抑制發色底物法抗Xa活性檢測，包括以下步驟：（1）彈簧針針刺機體末稍順暢采血；（2）置于CTAD抗凝塑料尖點管；（3）抗Xa稀釋液1:10稀釋樣本；（4）稀釋樣本加入擴散層過濾血細胞；（5）過濾后成為稀釋抗凝血漿；（6）滲透至反應層的血漿中待測肝素類藥物——低分子肝素LMWH成分通過中層抑制中和含過量Xa之中部分的Xa層析后；（7）含剩余Xa血漿通過下層時與含PNA發色底物的顯色層發生穩定的顯色反應；（8）在405nm和600nm波長處以反射光法測試吸光度差值dOD。該干化學競爭抑制發色底物法抗Xa活性檢測使用全新的檢測方法，可以更加精準的測算出肝素類抗凝藥物案或物質的活性含量。

技術領域

本發明涉及Xa抑制劑藥物活性檢測技術領域，具體為一種干化學競爭抑制發色底物法抗Xa活性檢測。

背景技術

肝素類抗凝藥物或物質及其他Xa抑制劑藥物，如：普通肝素UFH、低分子肝素LMWH、磺達肝癸鈉ARIXTRA、利伐沙班RIVA、阿哌沙班APIX等都含有共同的抑制Xa活性的抗凝作用，不同的僅是不同抗凝藥物所含抗Xa活性含量或濃度不同，抗Xa活性檢測通常采用的是競爭抑制的發色底物法，即：攝注體內的肝素類抗凝藥物或物質（含未知的抗Xa活性含量）通過采血取樣枸櫞酸鈉抗凝血漿在體外和人工配制的Xa（含已知過量定量的Xa活性含量）發生中和抑制反應，反應剩余下來的過量Xa與發色底物對硝基苯胺PNA產生黃色顯色反應，顯色越深表示肝素類抗凝藥物或物質活性含量越低，顯色越淺表示肝素類抗凝藥物或物質活性含量越高，與溯源性參考物作比較就可以定量檢測其抗Xa活性含量。

目前市面上所使用檢測方法通過將Xa與發色底物對硝基苯胺PNA產生黃色顯色反應來判斷肝素類抗凝藥物案或物質的活性含量，這種檢測方法無法確保檢測結果的精準程度，所以我們提出了一種干化學競爭抑制發色底物法抗Xa活性檢測，以便于解決上述中提出的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種干化學競爭抑制發色底物法抗Xa活性檢測，以解決上述背景技術提出的目前市面上所使用檢測方法通過將Xa與發色底物對硝基苯胺PNA產生黃色顯色反應來判斷肝素類抗凝藥物案或物質的活性含量，這種檢測方法無法確保檢測結果的精準程度的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種干化學競爭抑制發色底物法抗Xa活性檢測，包括以下步驟：

（1）彈簧針針刺機體末稍順暢采血；

（2）置于CTAD抗凝塑料尖點管；

（3）抗Xa稀釋液1:10稀釋樣本；

（4）稀釋樣本加入擴散層過濾血細胞；

（5）過濾后成為稀釋抗凝血漿；

（6）滲透至反應層的血漿中待測肝素類藥物——低分子肝素LMWH成分通過中層抑制中和含過量Xa之中部分的Xa層析后；

（7）含剩余Xa血漿通過下層時與含PNA發色底物的顯色層發生穩定的顯色反應；

（8）在405nm和600nm波長處以反射光法測試吸光度差值dOD；

（9）與同樣方法不同標準濃度的標準品測試形成的LMWH標準曲線作比較，相同批號試劑可以做一次定標（或制成固定標準比色條定標）并存儲于計算機；

（10）經儀器自動計算獲取抗Xa活性含量→通過高低質控品測試在質控范圍內；

（11）可以檢測臨床樣本。

優選的，所述檢測過程中所使用的檢測儀機型選用康上干式生化分析儀狀，檢測過程中所使用的濾光片選用405nm與600nm雙波長。

優選的，所述檢測過程中采集末梢全血時的采集量為50ul，且整個檢測過程不超過3分鐘。

優選的，所述檢測過程中所使用的試劑空白OD≥2.0A；檢測限：LMWH0.011IU/ml；UFH0.011IU/ml；RIVA2.365ng/ml，檢測準確度X≤[X±2SD]； CV=(X-T)/T≤│±15%│。