[發(fā)明專利]一種干化學競爭抑制發(fā)色底物法抗Xa活性檢測

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• 申請日: 2022-06-15
• 公開（公告）號: CN114965459A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發(fā)明（設計）人: 王平
• 申請（專利權）人: 上海貞元診斷用品科技有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31;G01N1/28;G01N1/38
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種干化學競爭抑制發(fā)色底物法抗Xa活性檢測，其特征在于，包括以下步驟：

（1）彈簧針針刺機體末稍順暢采血；

（2）置于CTAD抗凝塑料尖點管；

（3）抗Xa稀釋液1:10稀釋樣本；

（4）稀釋樣本加入擴散層過濾血細胞；

（5）過濾后成為稀釋抗凝血漿；

（6）滲透至反應層的血漿中待測肝素類藥物——低分子肝素LMWH成分通過中層抑制中和含過量Xa之中部分的Xa層析后；

（7）含剩余Xa血漿通過下層時與含PNA發(fā)色底物的顯色層發(fā)生穩(wěn)定的顯色反應；

（8）在405nm和600nm波長處以反射光法測試吸光度差值dOD；

（9）與同樣方法不同標準濃度的標準品測試形成的LMWH標準曲線作比較，相同批號試劑可以做一次定標（或制成固定標準比色條定標）并存儲于計算機；

（10）經(jīng)儀器自動計算獲取抗Xa活性含量→通過高低質控品測試在質控范圍內；

（11）可以檢測臨床樣本。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種干化學競爭抑制發(fā)色底物法抗Xa活性檢測，其特征在于：所述檢測過程中所使用的檢測儀機型選用康上干式生化分析儀狀，檢測過程中所使用的濾光片選用405nm與600nm雙波長。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種干化學競爭抑制發(fā)色底物法抗Xa活性檢測，其特征在于：所述檢測過程中采集末梢全血時的采集量為50ul，且整個檢測過程不超過3分鐘。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種干化學競爭抑制發(fā)色底物法抗Xa活性檢測，其特征在于：所述檢測過程中所使用的試劑空白OD≥2.0A；檢測限：LMWH0.011IU/ml；UFH0.011IU/ml；RIVA2.365ng/ml，檢測準確度X≤[X±2SD]； CV=(X-T)/T≤│±15%│。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種干化學競爭抑制發(fā)色底物法抗Xa活性檢測，其特征在于：所述檢測時的批內重復性≤│±5%│，日間批內重復性CV≤│±8%│，批間差CV≤│±10%│。

6.根據(jù)權利要求1所述的一種干化學競爭抑制發(fā)色底物法抗Xa活性檢測，其特征在于：所述檢測過程中各個成分的線性范圍低分子肝素LMWH在0.1~1.8IU/ml范圍內，其中0.1~0.3IU/ml絕對偏差B≤│±0.05│IU/ml，0.3~1.8IU/ml相對偏差CV≤│±15%│,相關系數(shù)r≤0.9900；

普通肝素UFH0.1~16IU/ml，其中0.1~0.3IU/ml絕對偏差B≤│±0.05│IU/ml，0.3~1.6IU/ml相對偏差CV≤│±15%│，相關系數(shù)r≤0.9900；

利伐沙班RIVA在10~344ng/ml范圍內，其中10.0~64.5ng/ml絕對偏差B≤│±10.75│ng/ml，64.5~344ng/ml相對偏差CV≤│±15%│，相關系數(shù)r≤0.9900。

7.根據(jù)權利要求1所述的一種干化學競爭抑制發(fā)色底物法抗Xa活性檢測，其特征在于：所述生物參考區(qū)間LMWH≤0.1U/ml；UFH≤0.1U/ml；RIVA≤21.5ng/ml，檢測過程中最大的稀釋倍數(shù)為1：3（混合人血漿）。

8.根據(jù)權利要求1所述的一種干化學競爭抑制發(fā)色底物法抗Xa活性檢測，其特征在于：所述整個檢測過程總誤差TEA為20%，允許總誤差1/2TEA為10%，不同方法學（如:末梢手指全血和靜脈抗凝血之間）比對相對偏差CV≤20%；不同儀器不同試劑比對相對偏差CV≤20%；相同儀器不同試劑比對相對偏差CV≤15%；相同試劑不同儀器比對相對偏差CV≤15%。