[發明專利]高表達FRα的重組載體、重組細胞及其構建方法和用途

在審

• 申請號: 202210673874.8
• 申請日: 2022-06-14
• 公開（公告）號: CN115161345A
• 公開（公告）日: 2022-10-11
• 發明（設計）人: 卜婷婷;嚴柳柳;張楠
• 申請（專利權）人: 同宜醫藥（蘇州）有限公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N7/01;C12N15/12;C12N5/10;C12Q1/02;C12R1/91;C12R1/93
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

1.一種包含葉酸受體α的編碼基因的重組病毒載體，其中，

所述葉酸受體α的編碼基因包含如下(i)或(ii)所示的核苷酸序列：

(i)如SEQ ID NO.1所示的序列；

(ii)與SEQ ID NO.1所示的序列具有80％以上同源性的核苷酸序列；

所述病毒載體選自腺病毒載體、慢病毒載體或逆轉錄病毒載體；

優選地，所述重組病毒載體為重組慢病毒載體，所述重組慢病毒載體包含如下(iii)或(iv)所示的核苷酸序列：

(iii)如SEQ ID NO.2所示的序列；

(iv)與SEQ ID NO.2所示的序列具有80％以上同源性的核苷酸序列。

2.一種包含葉酸受體α的編碼基因的重組病毒顆粒，其中，所述重組病毒顆粒由如權利要求1所述的重組病毒載體經過病毒包裝后得到。

3.一種表達葉酸受體α的重組細胞，其中，所述重組細胞包含如權利要求2所述的重組病毒顆粒；優選地，所述重組細胞來源于如下任一種細胞系：MDA-MB-231、HEC1B、PANC-1、TK10、A549。

4.一種表達葉酸受體α的重組細胞的構建方法，其中，所述構建方法包括如下步驟：

病毒感染步驟：將如權利要求2所述的重組病毒顆粒與癌細胞、細胞培養基和聚凝胺混合，進行共孵育；

篩選步驟：利用熒光篩選或抗生素篩選陽性克隆細胞。

5.根據權利要求4所述的構建方法，其中，在所述病毒感染步驟中，所述病毒感染的MOI值為20～50。

6.根據權利要求4或5所述的構建方法，其中，在所述病毒感染步驟中，所述癌細胞選自如下任一種細胞：MDA-MB-231、HEC1B、PANC-1、TK10、A549。

7.根據權利要求4～6中任一項所述的構建方法，其中，在所述病毒感染步驟中，所述聚凝胺的工作濃度為5～10μg/mL；所述細胞培養基為含有1％～7％(v/v)胎牛血清的IMDM培養基；

可選的，所述聚凝胺的工作濃度為5μg/mL、6μg/mL、7μg/mL、8μg/mL、9μg/mL或10μg/mL；

可選的，所述細胞培養基中胎牛血清的含量為1％(v/v)、2％(v/v)、3％(v/v)、4％(v/v)、5％(v/v)、6％(v/v)或7％(v/v)。

8.根據權利要求4～7中任一項所述的構建方法，其中，在所述篩選步驟中，所述抗生素為嘌呤霉素；

可選的，所述嘌呤霉素的工作濃度為1～20μg/mL；

可選的，所述嘌呤霉素的工作濃度為1μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL、5μg/mL、6μg/mL、7μg/mL、8μg/mL、9μg/mL、10μg/mL、11μg/mL、12μg/mL、13μg/mL、14μg/mL、15μg/mL、16μg/mL、17μg/mL、18μg/mL、19μg/mL或20μg/mL。

9.根據權利要求3所述的表達葉酸受體α的重組細胞，和/或根據權利要求4～8中任一項所述的方法構建的重組細胞在如下(a)～(c)至少一種中的用途：

(a)靶向葉酸受體α的藥物的篩選；

(b)靶向葉酸受體α的藥物的藥效評價；

(c)作為靶向葉酸受體α的藥物篩選或藥效評價的細胞模型；

優選地，所述靶向葉酸受體α的藥物為抗腫瘤藥物，更優選抗乳腺癌藥物。

10.一種靶向葉酸受體α的藥物的篩選方法，其中，所述方法包括將所述靶向葉酸受體α的藥物與根據權利要求3所述的表達葉酸受體α的重組細胞，和/或根據權利要求4～8中任一項所述的方法構建的重組細胞共孵育的步驟。