[發(fā)明專利]殼寡糖NMR波譜的歸屬方法及脫乙酰度的測定方法

有效

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• 申請日: 2022-06-13
• 公開（公告）號: CN114878624B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發(fā)明（設計）人: 張永勤;呂興霜;鄔雅喃;陳相玉;劉建瑞;劉芳;董靜文;劉銀春;潘文鳳
• 申請（專利權）人: 青島科技大學
• 主分類號: G01N24/08
• 分類號: G01N24/08
• 代理公司: 青島中天匯智知識產權代理有限公司 37241
• 代理人: 韓麗萍

1.一種殼寡糖的核磁共振譜圖的波譜歸屬方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

(1)殼寡糖核磁樣品溶液的制備

將干燥的殼寡糖樣品分別完全溶解于氘代試劑1和氘代試劑2，從而得到樣品溶液1和樣品溶液2，所述氘代試劑1為D₂O或D₂O與NaOD的混合溶液，所述NaOD的終濃度為0-0.02mol/L，所述氘代試劑2為酸性氘代試劑，其組成為D₂O和DCl的混合溶液，所述DCl的終濃度為0.02-0.05mol/L；

(2)樣品測試

將步驟(1)中制備的樣品溶液1和樣品溶液2分別置于核磁共振儀中，獲得殼寡糖的核磁共振譜圖1和核磁共振譜圖2；

(3)波譜歸屬

將步驟(2)中的核磁共振譜圖2與核磁共振譜圖1比較，在高場區(qū)將化學位移值未發(fā)生變化或較小幅度向高場移動的2.07±0.02ppm的質子峰確定為殼寡糖的N-乙酰基的甲基質子峰H_AC，將化學位移值發(fā)生較大幅度變化且向低場移動的2.00±0.09ppm的質子峰確定為殼寡糖樣品中因添加乙酸而產生的甲基質子峰H_A；化學位移值4.18～3.11ppm的質子峰群為殼寡糖的H₂-H₆的6個質子峰的總和H_2-6。

2.根據權利要求1所述的殼寡糖的核磁共振譜圖的波譜歸屬方法，其特征在于，所述的步驟(1)所述殼寡糖樣品的干燥方法為：在60℃下干燥1-2小時，升溫至80℃干燥1-2小時，再繼續(xù)升溫至105℃干燥0.5-1小時，干燥至恒重。

3.根據權利要求1所述的殼寡糖的核磁共振譜圖的波譜歸屬方法，其特征在于，所述的步驟(1)中樣品溶液1和樣品溶液2的殼寡糖濃度相同。

4.根據權利要求1所述的殼寡糖的核磁共振譜圖的波譜歸屬方法，其特征在于，所述樣品溶液1和樣品溶液2中殼寡糖的濃度為5-20mg/mL。

5.根據權利要求4所述的殼寡糖的核磁共振譜圖的波譜歸屬方法，其特征在于，所述的步驟(1)中樣品溶液1和樣品溶液2的殼寡糖濃度為10mg/mL。

6.根據權利要求1所述的殼寡糖的核磁共振譜圖的波譜歸屬方法，其特征在于，所述的步驟(1)中氘代試劑1的NaOD的終濃度為0-0.01mol/L。

7.根據權利要求6所述的殼寡糖的核磁共振譜圖的波譜歸屬方法，其特征在于，所述的步驟(1)中氘代試劑1的NaOD的終濃度為0.005-0.01mol/L。

8.根據權利要求1所述的殼寡糖的核磁共振譜圖的波譜歸屬方法，其特征在于，所述步驟(2)測試溫度為20-25℃。

9.一種測定殼寡糖的脫乙酰度的方法，其特征在于，在權利要求1所述的殼寡糖的核磁共振譜圖的波譜歸屬方法的基礎上，還包括以下步驟：

(4)質子峰的面積積分與計算

采用氘代試劑1的溶解的殼寡糖樣品的核磁共振譜圖，計算N-乙酰基的甲基質子峰H_AC的面積積分為I_AC；乙酸的甲基質子峰H_A的積分為I_A；殼寡糖的6個質子峰H_2-6的積分總和為I_2-6；則脫乙酰度DD、乙酸添加量D_A的計算公式如下：