[發明專利]一種埃可病毒30型野生乳鼠模型的構建方法及其應用

在審

• 申請號: 202210656386.6
• 申請日: 2022-06-10
• 公開（公告）號: CN115088674A
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發明（設計）人: 劉洪波;瞿穎;劉啟亮;王婧;陳泳蓓;朱丹東;但漢亮;章寧;何韻怡;甘燕媚
• 申請（專利權）人: 桂林醫學院第二附屬醫院
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A61K49/00;A61K38/21;A61P31/14
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 姚曉麗

1.一種埃可病毒30型野生乳鼠模型的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：動物接種：采用顱內注射的感染途徑，E30 A538病毒液濃度為3LD₅₀-5LD₅₀的10-30μl感染劑量，接種感染日齡為1-3日的感染品系為ICR小鼠、BALB/c小鼠和KM小鼠中的任意一種；

步驟2：臨床觀察：將步驟1中接種的小鼠進行隔離飼養，連續臨床觀察接種的小鼠，根據臨床觀察結果進行臨床評分，篩選后肢癱瘓和/或死亡接種的小鼠，即為埃可病毒30型野生乳鼠模型。

2.根據權利要求1所述一種埃可病毒30型野生乳鼠模型的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

所述步驟1中采用IC注射的感染途徑，E30 A538病毒液濃度為3LD₅₀-5LD₅₀的15-25μl感染劑量，接種感染日齡為1日的感染品系為ICR小鼠、BALB/c小鼠和KM小鼠中的任意一種。

3.根據權利要求1所述一種埃可病毒30型野生乳鼠模型的構建方法，其特征在于，所述步驟1中采用IC注射的感染途徑，E30 A538病毒液濃度為5LD₅₀的20μl感染劑量，接種感染日齡為1日的感染品系為ICR小鼠。

4.根據權利要求1所述一種埃可病毒30型野生乳鼠模型的構建方法，其特征在于，所述3LD₅₀-5LD₅₀中3LD₅₀為10^3.685TCID₅₀，5LD₅₀為10^3.907TCID₅₀。

5.根據權利要求1至4任一項所述一種埃可病毒30型野生乳鼠模型的構建方法，其特征在于，在所述的步驟1的動物接種前可進行感染劑量的篩選、感染日齡的篩選、感染途徑的篩選及感染品系篩選，所述感染劑量的篩選、感染日齡的篩選、感染途徑的篩選或感染品系篩選，包括如下步驟：

步驟1-1：接種動物準備：設置相應的實驗組和陰性對照組，每組的樣本量為3-15只，在相同環境下按照分組隔離并飼養；

步驟1-2：病毒液制備：使用稀釋液對E30 A538分離株進行稀釋，配制不同濃度的E30A538病毒液；

步驟1-3：動物接種：將步驟1-1中的實驗組接種步驟1-2的相應濃度的E30 A538病毒液；將步驟1-1中的陰性對照組注射的相應量的步驟1-2的稀釋液；

步驟1-4：臨床動物觀察：對步驟1-3中接種的實驗組和陰性對照組在相同環境進行隔離飼養，連續觀察實驗組和陰性對照組小鼠的臨床癥狀，計算死亡率。

6.根據權利要求5所述一種埃可病毒30型野生乳鼠模型的構建方法，其特征在于，所述步驟1-3動物接種中，實驗組的接種具體為：

用無菌稀釋液將E30 A538以10倍系列稀釋10^-2-10^-8，即10^7.375TCID₅₀-10^1.375TCID₅₀/mL，后經IC接種1日齡ICR小鼠，用于感染劑量的篩選；

將E30 A538按照5LD₅₀：10^3.907TCID₅₀/小鼠，經IC接種1、3、5和7日齡的ICR鼠，用于感染日齡的篩選；

用1日齡ICR鼠經IC、IP或IM接種5LD₅₀：10^3.907TCID₅₀/小鼠的E30 A538，用于感染途徑的篩選；

用5LD₅₀：10^3.907TCID₅₀/小鼠的E30 A538經IC分別接種1日齡ICR小鼠、BALB/c小鼠、KM小鼠、C57BL/6小鼠，用于感染品系篩選。