[發(fā)明專利]一種埃可病毒30型野生乳鼠模型的構(gòu)建方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210656386.6
• 申請日: 2022-06-10
• 公開（公告）號(hào): CN115088674A
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉洪波;瞿穎;劉啟亮;王婧;陳泳蓓;朱丹東;但漢亮;章寧;何韻怡;甘燕媚
• 申請（專利權(quán)）人: 桂林醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): A01K67/02
• 分類號(hào): A01K67/02;A61K49/00;A61K38/21;A61P31/14
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 姚曉麗

本發(fā)明涉及一種埃可病毒30型(Echovirus 30,E30)野生乳鼠模型的構(gòu)建方法及其應(yīng)用，涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，包括如下步驟：步驟1：動(dòng)物接種：通過感染劑量、日齡、途徑及品系篩選后，采用顱內(nèi)注射，E30臨床分離株A538病毒液濃度為3LD₅₀?5LD₅₀的10?30μl感染劑量，接種日齡為1?3日的ICR小鼠、BALB/c小鼠和KM小鼠中的任意一種；步驟2：臨床觀察：進(jìn)行臨床觀察和臨床評(píng)分，篩選臨床評(píng)分≥4的感染小鼠，即為E30野生型乳鼠模型。E30A538臨床分離株感染的野生型乳鼠模型能模擬人類自然感染特征，重復(fù)性好，可為E30感染特征、致病機(jī)制的研究及其疫苗和抗病毒藥物研發(fā)、篩選評(píng)估等提供有力工具。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種埃可病毒30型野生乳鼠模型的構(gòu)建方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

埃可病毒30型(Echovirus 30，E30)是小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)腸道病毒屬(Enterovirus，EVs)B組成員。E30主要感染0-4歲兒童和26-45歲成人；其疾病譜廣泛，除了是病毒性腦膜炎(Viral meningitis，VM)的主要病原體之一，E30感染還可引起病毒性腦炎(Viral encephalitis,VE)、手足口病(Hand，F(xiàn)oot and Mouth Disease，HFMD)、急性遲緩性麻痹(Acute flaccid paralysis，AFP)、病毒性心肌炎(Viral myocarditis，VMC)等多種疾病。

E30流行范圍廣泛。1983年E30在日本發(fā)生第一次流行，此后在世界各地如美國、法國、希臘、意大利、巴西、印度、韓國等國家均有小范圍的暴發(fā)流行。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示，1999年至2011年期間，E30是韓國的第二大最常見的EV血清型，并在2010-2014年期間經(jīng)常監(jiān)測到；與2015-2017年收集的數(shù)據(jù)相比，2018年E30的在歐洲的發(fā)病率很高，丹麥、德國、荷蘭、挪威和瑞典都報(bào)告了與E30相關(guān)的VM大規(guī)模激增，在所有確診的EV病例中，有14.5％檢測到E30，75％的病例中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損。近年來我國各地也出現(xiàn)了數(shù)起E30疫情，如山東、浙江、福建、河北、甘肅、廣東等。2004年，浙江省多地區(qū)如杭州、寧波、溫州爆發(fā)E30引起的VE，同年4月至8月，浙江省臨海市共報(bào)道有414例VE病例，其中從67份腦脊液標(biāo)本中分離到19份E30。在2013年至2015年河北省兒童醫(yī)院臨床診斷為VE和VM的住院患兒的442份腦脊液樣本中分離出26份E30。2015年6至8月，一起VE疫情發(fā)生在中國甘肅省瓜州縣，采集74例病例樣本132份，其中EV核酸檢測陽性72份，71份分子定型結(jié)果為E30，占EV的98.61％，此外，在29例病例的46份樣本分離到E30。在世界各地的疫情中發(fā)現(xiàn)，E30可和其他EV-B重組成新的毒株，導(dǎo)致傳播性或致病性發(fā)生變化，是E30病例不斷增加的主要原因。因此，研發(fā)預(yù)防性疫苗和篩選抗病毒藥物刻不容緩。

而具有典型臨床癥狀的動(dòng)物模型可用于探討疾病的病理生理機(jī)制，是藥效及疫苗評(píng)價(jià)的重要環(huán)節(jié)之一。據(jù)報(bào)道，已有多種EV動(dòng)物模型成功建立并運(yùn)用于藥物、疫苗開發(fā)和評(píng)價(jià)中。其中乳猴模型因其飼養(yǎng)成本高、倫理學(xué)等問題應(yīng)用受到一定的限制，而乳鼠模型因價(jià)格低廉、容易飼養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)周期短、已建立多種穩(wěn)定種群體系、可很好的模擬中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病癥狀等優(yōu)勢使用最廣泛。與嬰幼兒感染相似，EV模型常采用新生乳鼠建立。然而，由于鼠與人的受體存在差異，只有少數(shù)臨床分離株可直接構(gòu)建良好的乳鼠模型。據(jù)報(bào)道，將臨床分離株在動(dòng)物嗜性組織中進(jìn)行連續(xù)傳代，通過獲得毒力增強(qiáng)的強(qiáng)毒株可以建立發(fā)病或致死模型，但隨之而來不可避免的是病毒株的致病機(jī)制、病理損傷等特征的改變。而臨床分離株因其直接分離自發(fā)病患者，可直接反映人類流行毒株在小鼠體內(nèi)的致病性、致病過程及致病機(jī)理，對人用疫苗、藥物研發(fā)和應(yīng)用具有更好的應(yīng)用價(jià)值。