[發明專利]一種印度不動桿菌及其用途

在審

• 申請號: 202210654788.2
• 申請日: 2022-06-10
• 公開（公告）號: CN114891694A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 張倩穎;李東亮;賈云;張娟;蔣忠榮;李品鶴;鄭天飛;王躍;陳堅;李江華
• 申請（專利權）人: 四川中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01;A24B15/20
• 代理公司: 四川省成都市天策商標專利事務所(有限合伙) 51213
• 代理人: 劉興亮

1.一種印度不動桿菌Acinetobacter indicus SCT-B2，保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，其保藏編號為：CGMCC NO.23679。

2.如權利要求1所述的一種印度不動桿菌，其特征在于，所述印度不動桿菌為革蘭陰性桿菌，專性需氧，多為球桿狀、常呈雙排列，或單個存在，少數形成絲狀和鏈狀，黏液型菌株有莢膜，無芽孢，無鞭毛，最適生長溫度為35℃。

3.如權利要求1-2任一項所述的印度不動桿菌在微生物培養、煙葉發酵中的用途。

4.如權利要求1-2任一項所述的一種印度不動桿菌的獲取方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)振蕩洗脫煙葉上的微生物，離心收集微生物；

(2)將收集的微生物復溶后加入熒光染料cy5-hydrazide，在暗處染色；

(3)差速離心分離微生物和未結合的染料，先通過熒光顯微鏡檢測菌株的染色情況，然后通過流式細胞儀將被熒光標記的菌株分選至裝有YH培養基的96深孔板中進行培養；

(4)通過2，4-硝基苯肼測定培養基中醛酮化合物的含量，再使用GC-MS鑒定產物的種類，所得的菌株即為印度不動桿菌Acinetobacter indicus SCT-B2。

5.如權利要求4所述的一種印度不動桿菌的獲取方法，其特征在于，所述菌株的培養步驟為：

平板培養：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化鈉10g，瓊脂15g，蒸餾水1000mL，pH 7.0，將冷凍保存的甘油懸液接種到平板上，37℃恒溫培養24h；

搖瓶培養搖瓶培養：葡萄糖30g，蛋白胨20g，酵母粉15g，K₂HPO₄.1.5g NaH₂PO₄ 3g，加蒸餾水1000mL，調pH值為7.0，高壓蒸汽滅菌；搖瓶裝液量為10～20％(v/v)，接種量為2～5％(v/v)，培養溫度為30～35℃，搖床轉速為150～220rpm，搖瓶培養1～3天。

6.如權利要求4-5任一項所述的方法獲取的菌株在微生物培養、煙葉發酵中的用途。

7.一種煙葉的發酵方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、提供一種印度不動桿菌Acinetobacter indicus SCT-B2，其保藏編號為：CGMCCNO.23679；

B、將印度不動桿菌Acinetobacter indicus SCT-B2進行發酵培養，獲得發酵液及菌體；

C、將步驟B所得的發酵液及菌體用水、生理鹽水或者其它緩沖液進行稀釋，稀釋后菌液濃度達到10⁶～10¹²個菌/mL，將菌液按照煙葉重量的1～5％，加入到含水量為20～50％的煙葉中進行發酵，發酵溫度為30～50℃，發酵時間15～30天。