[發(fā)明專利]一種來源于預(yù)激活抗原提呈細(xì)胞的自身免疫疾病疫苗的制備方法及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210654017.3
• 申請日: 2022-06-10
• 公開（公告）號: CN114931633A
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉密
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州爾生生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K39/39;A61K45/06;A61P37/02;A61K9/50;A61K9/19;A61K47/69;A61K47/18;A61K47/26;A61K47/32;A61K47/42;A61K47/46;C12N5/0783
• 代理公司: 蘇州市中南偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

本發(fā)明涉及一種來源于預(yù)激活抗原提呈細(xì)胞的自身免疫疾病疫苗的制備方法及其應(yīng)用，制備方法包括以下步驟：將抗原提呈細(xì)胞與負(fù)載自身免疫疾病全細(xì)胞抗原的第一遞送粒子共孵育，得到預(yù)激活的抗原提呈細(xì)胞；將預(yù)激活的抗原提呈細(xì)胞細(xì)胞膜制備成納米囊泡或細(xì)胞膜組分負(fù)載在粒子表面的納米粒子或微米粒子，得到自身免疫疾病疫苗。本發(fā)明在實(shí)現(xiàn)源于樹突狀細(xì)胞的疫苗負(fù)載廣譜多樣的癌細(xì)胞抗原的同時克服了樹突狀細(xì)胞活性保持困難、無法凍干長期儲存等活細(xì)胞疫苗的難題，能夠制備負(fù)載廣譜自身免疫疾病抗原表位的疫苗，用于自身免疫疾病的預(yù)防和治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫治療領(lǐng)域，尤其涉及一種來源于預(yù)激活抗原提呈細(xì)胞的自身免疫疾病疫苗的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

自身免疫性疾病是一類嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，其發(fā)病機(jī)制是人體免疫系統(tǒng)因?yàn)槟承┰驅(qū)⒆陨淼奈镔|(zhì)誤認(rèn)為外來抗原并發(fā)動對含有這類抗原的細(xì)胞或組織的攻擊，導(dǎo)致一系列后果和疾病。以I型糖尿病為例，因?yàn)槟承┪赐耆芯壳宄脑颍瑱C(jī)體免疫系統(tǒng)誤將胰島或β細(xì)胞中的某些成分誤認(rèn)為外來抗原，從而啟動對β細(xì)胞的攻擊，并進(jìn)而殺傷大部分β細(xì)胞。由于β細(xì)胞是人體內(nèi)分泌胰島素的物質(zhì)，而胰島素是控制血糖的關(guān)鍵物質(zhì)，當(dāng)大部分β細(xì)胞被殺滅后，人體就無法產(chǎn)生足夠的胰島素控制血糖，因而I型糖尿病就發(fā)生了。因此，如果能夠預(yù)防或解除人體免疫系統(tǒng)對β細(xì)胞的攻擊，就能預(yù)防或逆轉(zhuǎn)治療I型糖尿病。而能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫耐受的疫苗是實(shí)現(xiàn)上述目的主要方法之一。由于β細(xì)胞主要是由效應(yīng)性T細(xì)胞(T_eff)攻擊的，所以誘導(dǎo)能夠和效應(yīng)性T細(xì)胞識別相同抗原但是對效應(yīng)性T細(xì)胞(T_eff)具有抑制作用的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(T_reg)就至關(guān)重要。因此，本發(fā)明旨在尋找一種高效誘導(dǎo)產(chǎn)生調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的方法，從而找到一種能夠有效預(yù)防和治療自身免疫疾病的方法。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種來源于被納米粒子和/或微米粒子激活的抗原提呈細(xì)胞，并用抗原提呈細(xì)胞的膜組分制備了一種納米疫苗(Nanovaccine,NP)或微米疫苗(Microvaccine,MP)，可用于自身免疫疾病的預(yù)防或治療。

本發(fā)明提供了一種來源于預(yù)激活抗原提呈細(xì)胞的自身免疫疾病疫苗的制備方法，包括以下步驟：

S1、將抗原提呈細(xì)胞與負(fù)載自身免疫疾病全細(xì)胞抗原的第一遞送粒子共孵育，得到預(yù)激活的抗原提呈細(xì)胞；

S2、將預(yù)激活的抗原提呈細(xì)胞細(xì)胞膜制備成納米囊泡，得到自身免疫疾病疫苗；

或?qū)㈩A(yù)激活的抗原提呈細(xì)胞的細(xì)胞膜組分負(fù)載在負(fù)載自身免疫疾病全細(xì)胞抗原的第二遞送粒子上，得到自身免疫疾病疫苗；

其中，

第一遞送粒子或第二遞送粒子分別獨(dú)立地為納米粒子或微米粒子；

所述自身免疫疾病全細(xì)胞抗原由以下步驟制備得到：將含有自身免疫疾病抗原的細(xì)胞或組織冷凍，加水進(jìn)行凍融裂解，收集上清液以及沉淀中經(jīng)溶解劑溶解后轉(zhuǎn)為可溶的部分，得到所述自身免疫疾病全細(xì)胞抗原；或?qū)⒑凶陨砻庖呒膊】乖募?xì)胞或組織加溶解劑進(jìn)行裂解，收集可溶部分，得到所述自身免疫疾病全細(xì)胞抗原。

進(jìn)一步地，溶解劑選自尿素、鹽酸胍、脫氧膽酸鹽、十二烷基硫酸鹽、甘油、蛋白質(zhì)降解酶、白蛋白、卵磷脂、無機(jī)鹽、Triton、吐溫、氨基酸、糖苷和膽堿中的一種或多種。

進(jìn)一步地，將預(yù)激活的抗原提呈細(xì)胞的細(xì)胞膜組分負(fù)載在負(fù)載自身免疫疾病全細(xì)胞抗原的第二遞送粒子上的同時，還包括將含有自身免疫疾病抗原細(xì)胞的細(xì)胞膜組分負(fù)載在第二遞送粒子上。其中，細(xì)胞膜組分包括細(xì)胞膜和/或細(xì)胞外囊泡膜。

進(jìn)一步地，當(dāng)遞送粒子(以下“遞送粒子”均表示第一遞送粒子或第二遞送粒子)同時負(fù)載抗原提呈細(xì)胞的膜組分和含有自身免疫疾病抗原的細(xì)胞的膜組分(以下均以β細(xì)胞的膜組分為例進(jìn)行說明)時，具體步驟包括：