[發(fā)明專利]一種BL-CQDs熒光探針的制備方法及其在ACE活性檢測和ACEI篩選的應用

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• 申請日: 2022-06-08
• 公開（公告）號: CN114958362A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發(fā)明（設計）人: 湛志華;薛茗月;毛惠會
• 申請（專利權）人: 嶺南師范學院
• 主分類號: C09K11/65
• 分類號: C09K11/65;C01B32/15;B82Y20/00;B82Y40/00;G01N21/64
• 代理公司: 深圳市能聞知識產權代理事務所(普通合伙) 44717
• 代理人: 宋靈劍

1.一種BL-CQDs熒光探針，其特征在于：以榕樹葉為原料，經萃取和碳化反應制得的碳量子點，簡稱BL-CQDs，所得BL-CQDs的晶格間距為0.209nm，具備類石墨烯結構；其微觀形貌呈單分散的均勻球狀分布，BL-CQDs顆粒的平均尺寸為1.6-1.8nm；其表面含有親水性官能團羥基、羰基和醛基；同時，BL-CQDs具備單激發(fā)雙發(fā)射熒光特性，即為BL-CQDs熒光探針。

2.根據權利要求1所述的BL-CQDs熒光探針，其特征在于：所述BL-CQDs的熒光探針具備光學特性、抗光漂白性、pH穩(wěn)定性、抗鹽穩(wěn)定性和抗干擾性；

所述光學特性為，BL-CQDs熒光量子產率Q為4.5％，具有單激發(fā)雙發(fā)射的熒光性能，具體為，在410nm最佳激發(fā)波長下的最佳發(fā)射峰位于480nm和673nm處，BL-CQDs在紫外燈下發(fā)出明亮的紅色熒光；

所述抗光漂白性表現為，BL-CQDs在氙燈和紫外燈下照射之后，其熒光強度與初始強度無明顯變化；

所述pH穩(wěn)定性表現為，BL-CQDs檢測的最佳緩沖溶液環(huán)境為pH值8.3的硼酸-硼酸鈉緩沖體系；

所述抗鹽穩(wěn)定性表現為，對ACE酶促產物馬尿酸HA具有特異選擇性和穩(wěn)定性；

所述抗干擾性，即對HA有特異選擇性表現為，常見金屬離子、陰離子和生物小分子對BL-CQDs的熒光信號基本不產生影響，常見金屬離子、陰離子和生物小分子具體如下，金屬離子包括Na+、K+、Ca2+、Fe3+、Mg2+、Al3+、Mn2+、Ba2+、NH4+、Zn2+、Cd2+、Pb2+、Bi2+；陰離子包括SO42-、SO32-、NO3-、NO2-、HPO42-、H2PO4-、CO32-和HCO3-；生物小分子包括Ala、Val、Leu、Pro、Trp、Cys、AA、Biotin、Glucose、DA、HA。

3.一種BL-CQDs熒光探針的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟1，原料的處理，以新鮮的榕樹葉為原料，將榕樹葉洗凈、榨碎后，在一定條件下進行萃取，即可得到萃取液；

步驟2，碳量子點的制備，在一定條件下，將步驟1所得萃取液進行溶劑熱碳化反應，反應完畢進行過濾，再將濾液通過超濾膜過濾，即可得到碳量子點溶液，所得碳量子點溶液簡稱為BL-CQDs，即BL-CQDs熒光探針。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述步驟1萃取的條件為，萃取劑為體積比為2：1的無水乙醇和丙酮混合溶液，萃取時間為30min；步驟1所得萃取液滿足原料配比為6g/30mL。

5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述步驟2溶劑熱碳化反應的條件為，反應溫度為180℃，反應時間為10h；

所述碳量子點溶液的保存和使用條件為，在保存溫度為4℃，當需要進行后續(xù)檢測時，稀釋10倍使用。

6.一種基于BL-CQDs熒光探針的ACE活性檢測方法的應用，其特征在于，ACE活性檢測方法包括以下步驟：

步驟a，標準血管緊張素轉化酶ACE溶液的酶促反應體系的建立，先將硼酸-硼酸鈉緩沖液BBS和馬尿酰-組氨酰-亮氨酸HHL混合，得到混合溶液，然后，在混合溶液中加入ACE，混合均勻后即可得到標準ACE溶液的酶促反應體系；

步驟b，酶失活反應體系的建立，將步驟a所得酶促反應體系在一定條件下進行水浴孵育，水浴完畢后，加入HCl終止反應，即可得到酶失活反應體系；

步驟c，酶失活反應體系的熒光強度測試，以BL-CQDs和HHL滿足一定體積比，將BL-CQDs加入步驟b所得酶失活反應體系中，在一定條件下進行熒光強度測試，即可獲得酶促反應的產物HA的濃度數據，即實現ACE活性檢測。