[發明專利]糞菌移植法建立高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證動物模型、評價及應用

有效

• 申請號: 202210646576.X
• 申請日: 2022-06-09
• 公開（公告）號: CN114831078B
• 公開（公告）日: 2023-08-11
• 發明（設計）人: 戰麗彬;陳寧;孫曉霞;翁澤斌;王景陽;路童
• 申請（專利權）人: 遼寧中醫藥大學
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A61D7/00;A61K49/00
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標代理有限公司 21107
• 代理人: 史力伏

本發明涉及一種動物模型的構建方法，具體涉及發明屬于一種動物模型的構建方法，具體涉及一種運用糞菌移植法建立高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證動物模型、評價方法及應用。本發明通過制備高血壓陰虛證和/或非陰虛證患者的糞菌液、小鼠灌服和飲水方式服用四聯抗生素藥物后移植制備的糞菌液，得到相應的高血壓陰虛證和/或非陰虛證動物模型，同時采用多種方法進行動物模型評價，確認模型建立是否成功。本發明提供一種穩定性高、易于推廣、重復性好、成功率高，經濟實用的高血壓陰虛證和/或非陰虛證動物模型，為中醫藥治療高血壓研究提供基礎，為實現陰虛證模型評價的標準化與規范化提供思路。

技術領域

本發明屬于一種動物模型的構建方法，具體涉及一種運用糞菌移植法建立高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證動物模型、評價及應用。

背景技術

高血壓是臨床常見病、多發病，是心腦血管病的發病基礎。約95％以上患者，?其病因不明稱為“原發性高血壓”，原發性高血壓又稱高血壓病，是以體循環動?脈血壓增高為主要表現的臨床綜合征；由多基因遺傳、環境及多種危險因素相互作用所致的全身性疾病。其中，除了高血壓病本身血壓增高有關癥狀外，長?期高血壓還可以影響心、腦、腎的功能，最終可導致這些器官功能衰竭，降低?患者的生活、工作質量，嚴重者可危及生命。尤其是我國正步入老齡化階段，?高血壓病的發病率呈逐年上升趨勢，致殘率、病死率極高，對患者生命健康帶?來嚴重威脅。臨床中如何選擇降壓效果好、毒副反應小、改善癥狀明顯、有靶?器官保護作用、價格合理的治療措施，是臨床醫生及患者都關注的問題。

腸道菌群是一個復雜且龐大的群體，在一個健康的成年人體內，腸道菌群總重量可達約1?-2千克，其中包含的細胞數量高達1013?-1014個，約是人體細胞數目的10倍，腸道微?生物編碼基因組數目約為人體編碼基因數目的100倍，因此也被稱為“第二基因組”。

糞菌移植”（Fecal?microbiota?transplantation，FMT），其定義是，將健康人糞便中的功能菌群，移植到患者胃腸道內，重建新的腸道菌群，實現腸道及腸道外疾病的治療，糞菌移植(fecal?microbiota?transplantation,FMT)?作為重建腸道菌群的有效手段。

目前，糞便移植試驗的小鼠模型不僅構建繁瑣、模型效果較差、難以反映真實情況；且未發現通過糞便移植方法建立高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證動物模型相關報道。

發明內容

本發明的目的克服了現有技術的不足，提供了一種建立高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證動物模型方法、評價方法和應用。

本發明由如下技術方案實現的。

第一方面。

本發明提供一種運用糞菌移植法建立高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證動物模型的方法，具體包括如下步驟：

（1）制備糞菌液：將來源于臨床確診為高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證患者的糞便制成糞菌液；

（2）小鼠灌服和飲水方式給藥四聯抗生素藥物，所述的四聯抗生素為氨芐青霉素、萬古霉素、新霉素、甲硝唑；

（3）模型建立：步驟2中小鼠分別移植步驟1制備的糞菌液，得到高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證模型。

進一步的，一種運用糞菌移植法建立高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證動物模型的方法，所述步驟(1)具體包括如下步驟：

A:配置0.9%生理鹽水內含10%甘油、0.1%L-半胱氨酸混合溶液，作為糞便保護液，高壓滅菌鍋內115℃煮熟20?min，糞便樣本置入裝有糞便保護液中，混勻；

B:?將步驟A得到的混勻糞便的糞便保護液過濾，得到濾液進行離心處理，棄上清液，所得沉淀為收集到的菌體；

C:使用糞便保護液重懸步驟B所得沉淀菌體；