[發明專利]糞菌移植法建立高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證動物模型、評價及應用

有效

• 申請號: 202210646576.X
• 申請日: 2022-06-09
• 公開（公告）號: CN114831078B
• 公開（公告）日: 2023-08-11
• 發明（設計）人: 戰麗彬;陳寧;孫曉霞;翁澤斌;王景陽;路童
• 申請（專利權）人: 遼寧中醫藥大學
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A61D7/00;A61K49/00
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標代理有限公司 21107
• 代理人: 史力伏

1.一種運用糞菌移植法建立高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證動物模型的方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

（1）制備糞菌液：將來源于臨床確診為高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證患者的糞便制成糞菌液；

具體包括如下步驟：

A:配置0.9%生理鹽水內含10%甘油、0.1%L-半胱氨酸混合溶液，作為糞便保護液，高壓滅菌鍋內115℃煮熟20min，糞便樣本置入裝有糞便保護液中，混勻；

B:將步驟A得到的混勻糞便的糞便保護液過濾，得到濾液進行離心處理，棄上清液，所得沉淀為收集到的菌體；離心條件為4000rpm?10min；

C:使用糞便保護液重懸步驟B所得沉淀菌體；

D:根據需要分裝糞菌液，-80℃保存；

步驟B、C、D均在厭氧環境下完成，其中厭氧環境要求O₂濃度2%；

（2）小鼠灌服和飲水方式服用四聯抗生素藥物，所述的四聯抗生素藥物為氨芐青霉素、萬古霉素、新霉素、甲硝唑；

具體包括如下步驟：

步驟1：小鼠選取階段，選取SPF級雄性C57BL/6小鼠，鼠齡6周；

步驟2：小鼠分類階段，將C57BL/6小鼠分類，分為健康菌液組（C組）、高血壓陰虛證菌液組（TY組）、高血壓非陰虛證菌液組（TNY組）；

步驟3：清除菌群階段，步驟2所述小鼠于第1周灌胃給藥四聯抗生素，第2周飲水給藥四聯抗生素；灌胃給藥量為氨芐青霉素5mg/只，萬古霉素5mg/只，新霉素5mg/只，甲硝唑4mg/只，飲水給藥四聯抗生素量為氨芐青霉素1g/L，萬古霉素0.5g/L，新霉素1g/L，甲硝唑1g/L；

步驟4：造模階段，步驟3所述小鼠分別移植健康志愿者、高血壓陰虛證患者及非陰虛患者糞菌液；移植糞菌液量為200μL/只/天，每隔天1天加強接種1次，持續5周；

（3）模型建立：步驟2中小鼠分別移植步驟1制備的糞菌液，得到高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證模型。

2.根據權利要求1所述的一種運用糞菌移植法建立高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證動物模型的方法，其特征在于客觀化評價高血壓病陰虛證相關表型，所述方法還包括：通過曠場實驗、易激惹評分、體溫、飲水量、唾液流率、糞便含水量、皮膚含水量、體質量、24h尿量、尿膽素原和膽紅素、心臟指數、攝食量、收縮壓、舒張壓及心率進行評價。

3.根據權利要求2所述的一種運用糞菌移植法建立高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證動物模型的方法，其特征在于，所述的曠場試驗包括小鼠的探索行為、小鼠在正中格停留時間、穿格次數、曠場區運動距離及運動速度。

4.權利要求1-3中任意一項所述的運用糞菌移植法建立高血壓陰虛證和/或高血壓非陰虛證動物模型的方法，其特征在于，將所述方法構建的高血壓動物模型包括用于研發高血壓的早期診斷試劑及方法和研發高血壓的治療藥物。