[發明專利]一種TIGIT基因干擾的嵌合抗原受體NK細胞及其應用

在審

• 申請號: 202210639709.0
• 申請日: 2022-06-08
• 公開（公告）號: CN114836428A
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 江文正;張穎
• 申請（專利權）人: 華東師范大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/113;C12N15/867;C12N15/62;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

本發明公開了一種TIGIT基因干擾的嵌合抗原受體NK細胞及其用途。本發明提出利用RNA干擾技術敲低TIGIT在NKG2D?CAR?NK細胞中的表達，普遍增強CAR?NK細胞功能的通用型方法，提升NKG2D?CAR?NK細胞免疫療法的效果。本發明還公開了一種TIGIT基因RNAi靶序列以及基于該靶序列的干擾序列、及其構建方法和應用。本發明可應用于惡性腫瘤病免疫治療中，為利用CAR?NK治療腫瘤提供新的改良思路，具有廣泛應用前景。

技術領域

本發明屬于生命科學技術研究領域，具體涉及一種TIGIT基因干擾的嵌合抗原受體NK 細胞及其用途。

背景技術

全球范圍內癌癥發病情況不斷加重，成為人類的主要死因之一[1]。根據GLOBACAN最新發布的全球癌癥數據，2021年全球新增癌癥病例約2000萬例，死亡病例約1000萬例，各類型癌癥分布呈現地區和性別差異[2]。目前臨床上針對癌癥的治療策略主要是以放化療、靶向治療、介入治療、免疫治療為主的多學科綜合治療法(multi-disciplinaryTreatment，MDT)，旨在緩解患者臨床癥狀，延長患者生存期[3]。

腫瘤免疫治療包括免疫檢查點阻斷、癌癥疫苗、細胞過繼免疫治療(adoptive Tcell transfer，ACT)、基于髓細胞的免疫治療等[4]。在細胞過繼免疫治療方面，嵌合抗原受體 T細胞(chimeric antigen receptor T-Cell，CAR-T)在惡性腫瘤尤其是血液惡性腫瘤的免疫治療中取得了良好的成效，CAR-T療法成為腫瘤免疫治療的研究熱點。然而，CAR-T在殺傷腫瘤的同時存在極大的副作用，例如CAR-T細胞回輸可能會引發大量細胞因子釋放(細胞因子風暴)，使機體出現發熱、發燒、呼吸衰竭等癥狀；對T細胞進行基因修飾可能會引起細胞突變；CAR-T的靶向性非常強，對表達相應抗原的腫瘤細胞和正常細胞都具有攻擊性，可能產生脫靶效應；CAR-T在實體腫瘤中殺傷能力不強，還可能導致神經系統受損、自身免疫疾病、腫瘤溶解等問題[5,6]。針對這些無法避免的弊端，人們開始將目光轉移到先天免疫系統的自然殺傷細胞(natural killer cell,NK cell)上。NK細胞具有不同于 T細胞的非特異性識靶和殺傷機制、短暫的生理周期、廣泛的腫瘤殺傷能力，被視為同樣有潛力通過CAR修飾增強其抗腫瘤能力的效應細胞[7]。與CAR-T相比，CAR-NK臨床使用更安全，不會誘發致死性的致死性的細胞因子釋放綜合征(cytokine release syndrome， CRS)和移植物抗宿主病(graft-versus-host disease，GVHD)，不會產生嚴重的神經毒性，且在體外細胞模型和體內動物模型中均顯示出良好的腫瘤殺傷作用[8]。

為了降低CAR-NK的脫靶效應，研究人員尋找更為有效的靶點。NKG2D受體表達于大多數天然免疫淋巴效應細胞上，其配體MICA/B在正常細胞上表達水平低甚至不表達，但在外源性或內源性刺激下(細胞分裂、病毒感染、癌變等)表達量顯著上調，在大多數腫瘤細胞上都會持續穩定表達。因此，NKG2D可以作為制備CAR-NK的理想靶向分子[9]。

帶有免疫球蛋白和ITIM結構域的T細胞免疫受體(T cell immunoglobulin andITIM domain，TIGIT)是近年新發現的一種在淋巴細胞上表達、具有免疫抑制作用的免疫檢查點分子，可以介導NK細胞的功能調控，影響腫瘤的免疫周期[10]。TIGIT的高親和力配體CD155在大多數正常組織中幾乎不表達或弱表達，但在一系列人類惡性腫瘤中表達上調，與TIGIT結合后，可以通過β-抑制蛋白2(β-arrestin 2)抑制核因子κB(Nuclear Factorkappa-B，NF-κB)信號通路限制NK細胞介導的細胞毒作用[11]。