[發(fā)明專利]一種膽綠素還原酶突變體及其編碼基因和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210638772.2
• 申請(qǐng)日: 2022-06-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115044565B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余允東;周嘉瑩;戴維;何家洛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山俊凱生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/02
• 分類號(hào): C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/16;C12R1/19
• 代理公司: 廣東金穗知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44852
• 代理人: 趙李娜

1.一種膽綠素還原酶突變體，其特征在于，所述的膽綠素還原酶突變體的氨基酸序列與SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列相比，在SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列的第151位、第226位、第228位進(jìn)行單點(diǎn)突變；

所述的單點(diǎn)突變?yōu)椋?/p>

當(dāng)SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列的第151位由苯丙氨酸突變?yōu)樯彼幔龅哪懢G素還原酶突變體的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:4所示；

或，當(dāng)SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列的第226位由精氨酸突變?yōu)樯彼幔龅哪懢G素還原酶突變體的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:6所示；

或，當(dāng)SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列的第228位由纈氨酸突變?yōu)樯彼幔龅哪懢G素還原酶突變體的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:8所示。

2.權(quán)利要求1所述的膽綠素還原酶突變體的編碼基因，其特征在于，氨基酸序列如SEQID?NO:4所示的膽綠素還原酶突變體的編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3所示；

或，氨基酸序列如SEQ?ID?NO:6所示的膽綠素還原酶突變體的編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:5所示；

或，氨基酸序列如SEQ?ID?NO:8所示的膽綠素還原酶突變體的編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:7所示。

3.含有權(quán)利要求2所述的編碼基因的載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的載體，其特征在于，所述的載體為pET表達(dá)載體、pCW表達(dá)載體、pUC表達(dá)載體或pPIC9k表達(dá)載體。

5.含有權(quán)利要求2所述的編碼基因的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述的宿主細(xì)胞為大腸桿菌、畢赤酵母、鏈霉菌或枯草芽孢桿菌。

6.權(quán)利要求1所述的膽綠素還原酶突變體、權(quán)利要求2所述的編碼基因、權(quán)利要求3或4所述的載體、權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞在制備膽紅素中的應(yīng)用。

7.一種制備膽紅素的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步驟：

S1.配置反應(yīng)體系，包含：1-5g/L權(quán)利要求1所述的膽綠素還原酶突變體，50mM?pH8.5磷酸鈉緩沖液，1-1.5g/L?NADPH，0.5-1g/L膽綠素；控制反應(yīng)體系溫度為30℃，進(jìn)行攪拌反應(yīng)；

S2.反應(yīng)2h后進(jìn)行紫外分光光度法檢測(cè)，即得膽紅素。