[發明專利]一種基于DNAzyme變構調節的DNA四面體樣納米機器、miRNA檢測方法及應用

在審

• 申請號: 202210636366.2
• 申請日: 2022-06-07
• 公開（公告）號: CN114934099A
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 陽莎;余戀雨;陳鳴;唱凱;詹新宇;羅潔;陳志國;王彬潘;趙爽;湯曉琦
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍陸軍軍醫大學第一附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/6825
• 分類號: C12Q1/6825;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 黃明光

1.一種基于DNAzyme變構調節的DNA四面體樣納米機器，其特征在于，所述納米機器由寡核苷酸鏈P1-P5和一條抑制劑鏈組成，所述寡核苷酸鏈P5與抑制劑鏈互補，所述抑制劑鏈含有DNA識別序列，所述DNA識別序列能夠與待測miRNA結合。

2.根據權利要求1所述的DNA四面體樣納米機器，其特征在于，所述寡核苷酸鏈P1、P2、P4、P3部分序列、P5部分序列構成所述DNA四面體的主框架；所述P5鏈的中間部分為E6型DNAzyme。

3.根據權利要求1所述的DNA四面體樣納米機器，其特征在于，所述寡核苷酸鏈P1、P2、P4構成所述DNA四面體的框架P₁₂₄，所述寡核苷酸鏈P5和抑制劑鏈構成鎖定的變構DNAzymeP₅I；所述抑制劑鏈的5'和3'末端分別設計兩個腳趾區域。

4.根據權利要求1或2所述的DNA四面體樣納米機器，其特征在于，所述P3鏈的5'端第10位堿基為RNA修飾的底物，所述第10位堿基為核糖核苷酸；所述P3鏈中的第24位堿基可以替換為淬滅基團。

5.根據權利要求1所述的DNA四面體樣納米機器，其特征在于，所述寡核苷酸鏈P1-P5的序列如SEQ ID NO.1-5所示，所述抑制劑鏈的序列選自SEQ ID NO.6-9所示序列中的一種。

6.權利要求1-5任意一項所述DNA四面體樣納米機器的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

將寡核苷酸鏈P1、P2、P4與緩沖液混合，經第一反應得到DNA四面體的框架P₁₂₄；寡核苷酸鏈P5、抑制劑鏈與緩沖液混合，經第二反應得到鎖定的變構DNAzyme P₅I；

將P₁₂₄、P₅I、P3與緩沖液混合，經第三反應即得所述的DNA四面體樣納米機器。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述緩沖液的組成為：10mM HEPES、100mM NaCl和50mM MgCl₂，pH 6.0。

8.一種miRNA的檢測方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

將權利要求1或5任意一項所述的DNA四面體樣納米機器與靶miRNA混合孵育，所得產物經凝膠電泳以及熒光檢測即可檢測靶miRNA。

9.根據權利要求8所述的檢測方法，其特征在于，所述孵育的溫度為20-40℃，所述孵育的時間為0.5-10h。

10.權利要求1-5任意一項所述的DNA四面體樣納米機器或權利要求8-9任意一項所述的檢測方法在miRNA檢測或調節中的應用。