[發明專利]一種大腸桿菌全局調控因子環腺苷酸受體蛋白突變體、基因工程菌及應用

有效

• 申請號: 202210632917.8
• 申請日: 2022-06-01
• 公開（公告）號: CN114957413B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發明（設計）人: 吳綿斌;袁東旭;馮磊磊
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07K14/245
• 分類號: C07K14/245;C12N15/31;C12N1/21;C12P7/18;C12R1/19
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 沈金龍

1.一種大腸桿菌全局調控因子環腺苷酸受體蛋白突變體，氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.3所示。

2.如權利要求1所述大腸桿菌全局調控因子環腺苷酸受體蛋白突變體的編碼基因。

3.如權利要求2所述編碼基因，其特征在于，基因序列如SEQ ID No.2或SEQ ID No.4所示。

4.如權利要求1所述大腸桿菌全局調控因子環腺苷酸受體蛋白突變體、如權利要求2或3所述編碼基因在由半纖維素水解液生產木糖醇中的應用。

5.如權利要求1所述大腸桿菌全局調控因子環腺苷酸受體蛋白突變體、如權利要求2或3所述編碼基因在增強大腸桿菌對焦糖色素及乙酸鹽耐受性中的應用。

6.一種基因工程菌，其特征在于，由大腸桿菌菌株IS5-5G將環腺苷酸受體蛋白83位氨基酸S突變為H、127位G突變為I、128位S突變為P或由大腸桿菌菌株IS5-5G將環腺苷酸受體蛋白83位氨基酸S突變為H、128位S突變為P得到；

所述大腸桿菌菌株IS5-5G是由大腸桿菌W3110敲除了ptsG基因、ptsF基因、xylA基因和xylB基因，再在大腸桿菌基因組IS序列整合5個拷貝的木糖還原酶表達模塊，最后將大腸桿菌的環腺苷酸受體蛋白112位氨基酸I突變為L、127位T突變為G、144位A突變為T得到。

7.如權利要求6所述的基因工程菌在生產木糖醇中的應用。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，生產木糖醇的原料為石灰預處理的玉米芯水解液。

9.一種生產木糖醇的發酵工藝，其特征在于，使用權利要求1所述的大腸桿菌全局調控因子環腺苷酸受體蛋白突變體、權利要求2或3所述編碼基因、或權利要求6所述的基因工程菌發酵生產木糖醇。

10.如權利要求9所述的發酵工藝，其特征在于，具體步驟包括：

(1)活化培養：將含有權利要求1所述的大腸桿菌全局調控因子環腺苷酸受體蛋白突變體的菌株、含有權利要求2或3所述編碼基因的菌株、或權利要求6所述的基因工程菌接種到平板培養基上活化培養，得到活化菌；

(2)種子培養：將步驟(1)得到的活化菌接種于種子培養基進行種子培養，得到種子液；

(3)將種子液接種到發酵培養基中發酵生產木糖醇，控制溶氧為35～40％；玉米芯水解液第一次補料是以恒定流速在2h內流加入滅菌的玉米芯水解液，控制木糖濃度達到50g/L；當木糖濃度低于40g/L時，開始第二批連續流加玉米芯水解液補料，初始流加木糖的速度為4g/L/h，控制木糖濃度在30～40g/L；當發酵液pH上升至8、且溶氧超過70％時，葡萄糖耗盡，木糖小于2g/L時，到達發酵終點。