[發(fā)明專利]細胞因子融合蛋白的ADA分析方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210630417.0 | 申請日： | 2022-06-06 |
| 公開（公告）號： | CN115078730A | 公開（公告）日： | 2022-09-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 戴佳珍 | 申請（專利權(quán)）人： | 蘇州方達新藥開發(fā)有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/53 |
| 代理公司： | 重慶百潤洪知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50219 | 代理人： | 陳付玉 |
| 地址： | 215100 江蘇省蘇州市吳中經(jīng)濟*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 細胞因子 融合 蛋白 ada 分析 方法 | ||
1.細胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于包括以下步驟：
S1.將樣品酸化處理；
S2.將酸化樣品經(jīng)中和后在抗原包被的酶標(biāo)板上孵育，形成Drug-ADA免疫復(fù)合物；
S3.將Drug-ADA免疫復(fù)合物從酶標(biāo)板上酸化洗脫；
S4.將洗脫物與Master-mixture工作液孵育，形成Biotin-Drug-ADA-Drug-Sulfo復(fù)合物；
S5.將Biotin-Drug-ADA-Drug-Sulfo復(fù)合物加至MSD板上孵育；
S6.測量與MSD板結(jié)合的復(fù)合物的可檢測發(fā)光信號，發(fā)光信號值與樣品中ADA濃度成正比。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S1中酸化處理具體為：將樣品經(jīng)封閉緩沖液稀釋后，加入酸性溶液，在室溫，500-800rpm轉(zhuǎn)速下，酸化反應(yīng)10-30min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S2中抗原包被的酶標(biāo)板上的抗原為細胞融合蛋白。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S2中中和處理具體為：1M Tris溶液與酸化樣品的體積比為1:10混合。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的細胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S3中酸化洗脫具體為：向酶標(biāo)板上加入酸性溶液，在室溫，500-700rpm下，酸化反應(yīng)10-30min。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的細胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S1和S3中酸化處理中采用的酸性溶液包括但不限于醋酸溶液、甘氨酸-HCl緩沖液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S4中Master-mixture工作液采用如下方法制得：將生物素標(biāo)記抗原、釕標(biāo)記抗原用Tris-BSA溶液稀釋至濃度比為(0.1-1)μg/mL：(0.1-1)μg/mL。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S5中孵育條件：將Master-mixture工作液和洗脫物加置稀釋板，在室溫，120-200rpm轉(zhuǎn)速下，孵育1-3h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S5中洗滌孵育后的MSD板以去除未結(jié)合的復(fù)合物，然后進入S6。
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