[發(fā)明專利]一種基于磁微粒時(shí)間分辨熒光免疫分析法的胰石蛋白檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210630331.8
• 申請日: 2022-06-06
• 公開（公告）號(hào): CN115078708A
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 項(xiàng)忠誼;黃飚;王璐;周秀梅;秦源;趙雪琴;王毅剛
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江理工大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/58;G01N33/533;G01N33/68
• 代理公司: 浙江納祺律師事務(wù)所 33257
• 代理人: 鄭滿玉;王士祥

1.一種基于磁微粒時(shí)間分辨熒光免疫分析法的胰石蛋白檢測方法，其特點(diǎn)在于：將PSP包被抗體包被在磁珠表面，形成免疫磁珠-抗體復(fù)合物，其中，0.1mg抗體包被10mg磁珠，抗體與磁珠的孵育條件為室溫避光旋轉(zhuǎn)16h；

對磁珠進(jìn)行洗滌和分離，去除未結(jié)合的抗體；

將銪標(biāo)記到PSP檢測抗體，并對抗體的使用量進(jìn)行優(yōu)化以確定適合的抗體使用劑量，用分析緩沖液進(jìn)行稀釋，避免檢測抗體過量；

將優(yōu)化劑量的磁珠，銪標(biāo)檢測抗體和待測樣品，孵育條件為37℃震蕩12min，最終形成磁珠-PSP包被抗體-PSP抗原-銪標(biāo)PSP檢測抗體熒光免疫復(fù)合物，經(jīng)時(shí)間分辨儀進(jìn)行熒光檢測分析。

2.如權(quán)利要求1所述的一種基于磁微粒時(shí)間分辨熒光免疫分析法的胰石蛋白檢測方法，其特點(diǎn)在于：免疫磁珠具有羧基修飾的功能基團(tuán)，羧基修飾的功能基團(tuán)的活化條件為：分別配置N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)，每10mg磁珠加入10mg/mL的N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和10mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)各28μL和40μL，并在室溫避光旋轉(zhuǎn)反應(yīng)30min。

3.如權(quán)利要求1或2所述的一種基于磁微粒時(shí)間分辨熒光免疫分析法的胰石蛋白檢測方法，其特點(diǎn)在于：利用離心管和磁力架對磁珠進(jìn)行洗滌和分離。

4.如權(quán)利要求1或2所述的一種基于磁微粒時(shí)間分辨熒光免疫分析法的胰石蛋白檢測方法，其特點(diǎn)在于：利用酶標(biāo)板和96孔板磁力架對磁珠進(jìn)行洗滌和分離。

5.如權(quán)利要求1所述的一種基于磁微粒時(shí)間分辨熒光免疫分析法的胰石蛋白檢測方法，其特點(diǎn)在于：采用異硫氰酸芐基二亞乙基三胺四乙酸銪(DTTA-Eu)為雙功能螯合試劑，其一端螯合銪，另一端可與抗體的NH₂連接，每1mg抗體連接0.2mg銪螯合物。

6.如權(quán)利要求1所述的一種基于磁微粒時(shí)間分辨熒光免疫分析法的胰石蛋白檢測方法，其特點(diǎn)在于：磁珠-PSP包被抗體-PSP抗原-銪標(biāo)PSP檢測抗體熒光免疫復(fù)合物以銪作為熒光示蹤物，加入增強(qiáng)液使銪解離，再根據(jù)其熒光強(qiáng)度計(jì)算待測物含量。

7.如權(quán)利要求6所述的一種基于磁微粒時(shí)間分辨熒光免疫分析法的胰石蛋白檢測方法，其特點(diǎn)在于：通過識(shí)別利用時(shí)間分辨熒光測量法和光譜分離技術(shù)排除樣品中非特異性干擾，測定最后產(chǎn)物中的熒光強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)有效地提高了檢測的靈敏度。