[發明專利]一種麥胚免疫球蛋白的制備方法

在審

• 申請號: 202210630211.8
• 申請日: 2022-06-06
• 公開（公告）號: CN114853884A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 張艷雪;梁妍;黃少華;馬俊騎;伍成杰;杜逸聰;武衡;屈艷珠;李小林;彭麗丹;馬子欣
• 申請（專利權）人: 重慶工商大學
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C12P21/06;C07K1/34;C07K1/14;C07K1/107
• 代理公司: 廣州科峻專利代理事務所(普通合伙) 44445
• 代理人: 唐海斐

1.一種麥胚免疫球蛋白的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）溶解：脫脂麥胚粉以質量體積比1:10的比例加入質量分數為1%的NaCl溶液中，攪拌均勻，25℃恒溫震蕩1-2h；

（2）酶解：結束震蕩后，離心，取上清液，加入堿性蛋白酶在50-60℃，pH9-10條件下酶解2-3h，然后加熱到100℃滅酶10min，冷卻后在4000 r/min離心20 min；

（3）超濾：取適量酶解液，加適量去離子水稀釋，用0.45 μm 微孔濾膜過濾，泵入超濾系統，選擇截留分子量為10ku的超濾膜除去大分子物質，收集透過液；

（4）純化：將含磁性納米顆粒的醛基化醋酸纖維素膜浸入模板蛋白溶液中，并加入單體以及交聯劑的混合溶液，填充保護氣體后，將引發劑和模板蛋白磁性復合微球混合溶液涂覆到膜上，制備磁性分子印跡多孔膜，然后將多孔膜浸入步驟（3）所述的蛋白透過液12h，進行吸附；

（5）洗滌：分子印跡多孔膜經過0.1mol/L稀硫酸振蕩洗滌3次；

（6）修飾：將洗脫的麥胚蛋白10~15g加入200~300mL 0.02mol/L，pH6.8的磷酸鹽緩沖溶液中稀釋，然后加入1~2g Na211At，0.1～0.2g 5-三甲基錫-3-吡啶甲酸N-琥珀酰亞胺酯，攪拌均勻；升溫到30～35℃，加入0.1～0.2 mL過氧化物酶，反應10~20min；加入偏重亞硫酸鈉水溶液5～10mL終止反應；

（7）洗脫、檢測：將反應液過Sepadex G50柱層析，用0.1mol/L，pH7.0的磷酸緩沖溶液洗脫，紫外檢 測后，收集洗脫峰即得麥胚免疫活性蛋白。