[發明專利]一種麥胚免疫球蛋白的制備方法

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• 申請號: 202210630211.8
• 申請日: 2022-06-06
• 公開（公告）號: CN114853884A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 張艷雪;梁妍;黃少華;馬俊騎;伍成杰;杜逸聰;武衡;屈艷珠;李小林;彭麗丹;馬子欣
• 申請（專利權）人: 重慶工商大學
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C12P21/06;C07K1/34;C07K1/14;C07K1/107
• 代理公司: 廣州科峻專利代理事務所(普通合伙) 44445
• 代理人: 唐海斐

本發明涉及一種麥胚免疫球蛋白的制備方法，屬于功能食品加工技術領域；包括如下步驟：（1）溶解：脫脂麥胚粉加入NaCl溶液中，攪拌均勻，25℃恒溫震蕩1?2h；（2）酶解：震蕩后的溶液取上清液，加入堿性蛋白酶酶解，加熱滅酶后冷卻離心；（3）超濾：選擇截留分子量為10ku的超濾膜除去大分子物質，收集透過液；（4）純化：制備磁性分子印跡多孔膜，然后將多孔膜浸入蛋白透過液12h，進行吸附；（5）洗滌：分子印跡多孔膜經過稀硫酸振蕩洗滌；（6）修飾：洗脫的麥胚蛋白用Na211At修飾；（7）洗脫檢測：反應液過Sepadex G50柱層析，洗脫，紫外檢測，收集洗脫峰即得麥胚免疫活性蛋白；該方法制備的小麥免疫球蛋白，純度高、活性強、吸收效率好，天然安全無毒副作用。

技術領域

本發明涉及一種純度高、活性強、吸收效率好的小麥免疫球蛋白的制備方法，屬于功能食品加工技術領域。

背景技術

小麥胚芽占小麥籽粒的1. 5%~3%，是整個小麥籽粒營養價值最高的部分，被營養學家稱為“人類天然的營養寶庫”。麥胚蛋白是一種完全蛋白，占麥胚質量的30%，而且小麥胚芽蛋白質中必需氨基酸的相互比值，與FAO/WTO頒布的模式值，以及大豆、牛肉、雞蛋的氨基酸構成比例基本接近，明顯優于大米、面粉蛋白質中必需氨基酸的構成比例，有很好的平衡氨基酸作用，在營養學上具有重要意義。

麥胚球蛋白與人血丙種球蛋白功能類似，是從小麥中提取出來的一類植物源球蛋白。麥胚球蛋白在麥胚總蛋白中占比20%左右，是麥胚中除白蛋白外含量最高、功能最全的蛋白質。

Danielson采用超速離心技術分離并研究了小麥籽粒和谷物胚芽中的球蛋白組分，結果證明麥胚球蛋白是一種相對分子量為213kD的單一蛋白；基于LC/MS對麥胚球蛋白組分鑒定、代謝通路分析，經GO功能注釋和KEGG Pathway 分析發現麥胚球蛋白共涉及分子功能31種、細胞組成47種和生物過程調控87種，參與到代謝通路調控104條，具有很好的免疫、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老等功效。

目前國際上，免疫球蛋白幾乎全部來源于血液制品，人或動物血液原料的不可再生和由于血漿來源的限制，造成了其供不應求的市場現狀。然而，傳統血液制品具有不可忽視的安全隱患，即來自于血液傳播疾病如艾滋病、乙型肝炎等的威脅，使得病人對應用血漿中提取的血清蛋白作為醫藥用途產生了巨大的擔憂。因此，開發一種原料來源廣泛、價格低廉、活性高、安全性強的植物源免疫球蛋白勢在必行。

發明內容

本發明的目的是提供一種純度高、活性強、吸收效率好的小麥免疫球蛋白的制備方法。

為了達到上述目的，本發明所采用的技術方案是：

一種麥胚免疫球蛋白的制備方法，包括如下步驟：

（1）溶解：脫脂麥胚粉以質量體積比1:10的比例加入質量分數為1%的NaCl溶液中，攪拌均勻，25℃恒溫震蕩1-2h；

（2）酶解：結束震蕩后，離心，取上清液，加入堿性蛋白酶在50-60℃，pH9-10條件下酶解2-3h，然后加熱到100℃滅酶10min，冷卻后在4000 r/min離心20 min；

（3）超濾：取適量酶解液，加適量去離子水稀釋，用0.45 μm 微孔濾膜過濾，泵入超濾系統，選擇截留分子量為10ku的超濾膜除去大分子物質，收集透過液；

（4）純化：將含磁性納米顆粒的醛基化醋酸纖維素膜浸入模板蛋白溶液中，并加入單體以及交聯劑的混合溶液，填充保護氣體后，將引發劑和模板蛋白磁性復合微球混合溶液涂覆到膜上，制備磁性分子印跡多孔膜，然后將多孔膜浸入步驟（3）所述的蛋白透過液12h，進行吸附；

（5）洗滌：分子印跡多孔膜經過0.1mol/L稀硫酸振蕩洗滌3次；