[發明專利]一種用于亞精胺合成的基因及高產亞精胺菌株的構建

有效

• 申請號: 202210629535.X
• 申請日: 2022-06-01
• 公開（公告）號: CN114874962B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發明（設計）人: 張山;丁利平
• 申請（專利權）人: 深圳中科欣揚生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/60;C12N15/54;C12N15/31;C12P13/00;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

1.一種重組大腸桿菌，其特征在于，以大腸桿菌為宿主，異源表達里氏木霉來源的甲硫氨酸脫羧酶基因，并過表達內源的亞精胺合成酶基因和鳥氨酸脫羧酶基因。

2.根據權利要求1所述的重組大腸桿菌，其特征在于，利用質粒串聯表達所述甲硫氨酸脫羧酶基因、亞精胺合成酶基因和鳥氨酸脫羧酶基因，可選地，在此質粒上同時表達S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因。

3.根據權利要求2所述的重組大腸桿菌，其特征在于，在大腸桿菌基因組中敲除亞精胺乙酰轉移酶基因。

4.根據權利要求3所述的重組大腸桿菌，其特征在于，表達鮑曼不動桿菌來源的AmvA基因或大腸桿菌來源的MdtJI基因；所述AmvA基因的Gene ID:66396847。

5.根據權利要求4所述的重組大腸桿菌，其特征在于，敲除亞精胺吸收轉運體蛋白基因potD，所述基因potD的Gene ID：945682。

6.一種生產亞精胺的方法，其特征在于，利用權利要求1～5任一所述的重組大腸桿菌，以鳥氨酸和甲硫氨酸為底物轉化生產亞精胺。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，將所述重組大腸桿菌培養至OD₆₀₀＝3±0.5，按照1％～5％的量接種至搖瓶發酵體系中，在L-阿拉伯糖的誘導下培養不少于10h，再向體系中加入10～20mM鳥氨酸和15～30mM甲硫氨酸，催化不少于20h；

或者，將所述重組大腸桿菌在種子培養基中培養得到種子液，再將種子液接種至發酵罐體系中，培養至OD₆₀₀＝30，在L-阿拉伯糖的誘導下培養不少于20h，再向發酵體系中添加甲硫氨酸和硫酸。

8.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于，發酵過程中以2g/L/h的量添加葡萄糖，并通過調整攪拌轉速和通氣量維持溶氧在20％±2％，并維持發酵體系中pH為7.0±0.5。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述L-阿拉伯糖在發酵體系中的質量百分比為不少于0.1％；添加終濃度為1.0～1.5g/L甲硫氨酸和1.5～3g/L硫酸的量加入甲硫氨酸和硫酸。

10.權利要求1～5任一所述的重組大腸桿菌在生產亞精胺及其衍生物中的應用。