[發明專利]一種采用EMS誘變創制觀賞鳳梨新品種的方法

在審

• 申請號: 202210628158.8
• 申請日: 2022-06-06
• 公開（公告）號: CN114902961A
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發明（設計）人: 王翔宇;秦源;羅甜甜;袁潔瑜;劉燕輝;姚立昂;遲銘
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 林文弘;蔡學俊

本發明屬于鳳梨育種技術領域，具體為一種采用EMS誘變創制觀賞鳳梨新品種的方法。本發明以‘臺農11’鳳梨的幼嫩側枝作為外植體，建立無菌組培體系，采用組織培養技術和EMS誘變相結合的方法獲得EMS誘變植株。該方法得到的EMS誘變植株株型秀美，頗具觀賞價值。

技術領域

本發明屬于鳳梨育種技術領域，具體涉及一種采用EMS誘變創制觀賞鳳梨新品種的方法。

背景技術

觀賞鳳梨為鳳梨科（Bromeliaceae）觀賞植物，原產于美洲的熱帶和亞熱帶地區，其株型獨特，葉形優美，花型花色豐富漂亮，花期長，觀花觀葉俱佳，而且絕大部分耐陰，適合室內長期擺設觀賞，是極為理想的室內觀賞植物，在全世界深受人們的喜愛，是一種有較大發展前景和名符其實的名優高檔禮品盆花。隨著觀賞鳳梨的大批量引進和國產化栽培，相關的研究也逐漸受到關注。

遺傳材料創制對于生物科學的發展具有十分重要的作用，誘導植物產生變異，構建突變體庫， 從中篩選目標突變體，可以為植物基因功能研究提供豐富的基礎材料。甲基磺酸乙酯（EMS，Ethyl Methane Sulfonate）是目前種質資源創新工作中使用最廣泛的化學誘變劑，具有誘變成本低、操作簡單便利、突變率高、對材料的損傷小、不易引起染色體畸變、突變譜較廣等諸多特點。據目前研究報道小麥 EMS 誘變通常是利用種子進行誘變處理，也有部分利用愈傷組織等進行誘變處理的報道，采用的誘變方法主要有滴液法、浸泡法、共培養法。然而，目前尚未有用EMS誘變鳳梨植物突變體構建觀賞鳳梨新品種的方法的報道。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的是提供一種通過EMS誘變創制誘導鳳梨突變體的方法，創制特殊突變材料，從而豐富鳳梨的遺傳多樣性，以及提高鳳梨作為觀賞植物的觀賞價值，并從中篩選出優異的具有觀賞性的鳳梨種質資源。

為達到上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種采用EMS誘變創制觀賞鳳梨新品種的方法，其特征在于：所述方法具體包括以下步驟：

1）試驗材料的選取：

選用一年以上臺農11菠蘿植株的幼嫩側枝進行組織培養體系的建立，將幼嫩側枝剪切成長2cm的莖段，以制作好的莖段作為組織培養的外植體；

2）無菌外植體的制作：

將外植體進行消毒處理：5%百菌清浸泡過夜→清水沖洗10分鐘→洗潔精稀釋液清洗3小時→清水沖洗直至洗凈外植體表面泡沫→75%酒精清洗5分鐘→無菌蒸餾水清洗3遍→0.1%氯化汞消毒10分鐘→滅菌蒸餾水清洗3遍，將消毒后的外植體放在無菌濾紙上自然晾干；

3）愈傷組織誘導：

將晾干后的外植體葉片切成2cm²的方塊，接種到愈傷組織誘導培養基中，輕輕按壓使外植體貼合培養基，放置于培養室中培養60 d形成愈傷組織；培養條件為：溫度為32℃~35℃，濕度為80%，光照強度40 μmol·m^-2·s^-1，光照時間8h/d；

4）EMS誘導：

將存活的愈傷組織切成長度為2 cm的段狀浸泡于體積比濃度0.6%的EMS-磷酸緩沖液中，在20 ℃、30 r/min條件下震蕩處理6 h，處理完成后加入終濃度為5%的Na₂S₂O₃】以終止反應，再將愈傷組織用滅菌超純水清洗3次，清洗過的愈傷組織放置于濾紙上自然晾干；

5）不定芽誘導分化：

將EMS誘導處理后的愈傷組織接種到不定芽誘導分化培養基中，放置于培養室中培養45 d形成不定芽；培養條件為：溫度為32℃~35℃，濕度為80%，光照強度40 μmol·m^-2·s^-1，光照時間8h/d；

6）生根誘導：