[發(fā)明專利]一種采用EMS誘變創(chuàng)制觀賞鳳梨新品種的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210628158.8
• 申請日: 2022-06-06
• 公開（公告）號: CN114902961A
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王翔宇;秦源;羅甜甜;袁潔瑜;劉燕輝;姚立昂;遲銘
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 林文弘;蔡學俊

1.一種采用EMS誘變創(chuàng)制觀賞鳳梨新品種的方法，其特征在于：所述方法具體包括以下步驟：

1）試驗材料的選取：

選用一年以上臺農(nóng)11菠蘿植株的幼嫩側(cè)枝進行組織培養(yǎng)體系的建立，將幼嫩側(cè)枝剪切成長2cm的莖段，以制作好的莖段作為組織培養(yǎng)的外植體；

2）無菌外植體的制作：

將外植體進行消毒處理：5%百菌清浸泡過夜→清水沖洗10分鐘→洗潔精稀釋液清洗3小時→清水沖洗直至洗凈外植體表面泡沫→75%酒精清洗5分鐘→無菌蒸餾水清洗3遍→0.1%氯化汞消毒10分鐘→滅菌蒸餾水清洗3遍，將消毒后的外植體放在無菌濾紙上自然晾干；

3）愈傷組織誘導(dǎo)：

將晾干后的外植體葉片切成2cm²的方塊，接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，輕輕按壓使外植體貼合培養(yǎng)基，放置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)60 d形成愈傷組織；培養(yǎng)條件為：溫度為32℃~35℃，濕度為80%，光照強度40 μmol·m^-2·s^-1，光照時間8h/d；

4）EMS誘導(dǎo)：

將存活的愈傷組織切成長度為2 cm的段狀浸泡于體積比濃度0.6%的EMS-磷酸緩沖液中，在20 ℃、30 r/min條件下震蕩處理6 h，處理完成后加入終濃度為5%的Na₂S₂O₃以終止反應(yīng)，再將愈傷組織用滅菌超純水清洗3次，清洗過的愈傷組織放置于濾紙上自然晾干；

5）不定芽誘導(dǎo)分化：

將EMS誘導(dǎo)處理后的愈傷組織接種到不定芽誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中，放置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)45d形成不定芽；培養(yǎng)條件為：溫度為32℃~35℃，濕度為80%，光照強度40 μmol·m^-2·s^-1，光照時間8h/d；

6）生根誘導(dǎo)：

將不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的長成的健壯的鳳梨組培苗接種于生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，放置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)30 d誘導(dǎo)生根；培養(yǎng)條件為：溫度為32℃~35℃，濕度為80%，光照強度40 μmol·m^-2·s^-1，光照時間8h/d；

7）促根壯苗培養(yǎng)：

經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得根長3 cm以上的鳳梨組培苗轉(zhuǎn)接到促根壯苗培養(yǎng)基中，放置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)30 d獲得根系發(fā)達健壯的鳳梨組培苗完整植株；

8）煉苗移栽

獲得根系發(fā)達健壯的鳳梨組培苗完整植株后，將培養(yǎng)瓶移到室外遮陰蓬下進行強光閉瓶練苗15天，遮陰度宜為50%~70%，然后打開瓶口再繼續(xù)放置5天，再將組培苗移入營養(yǎng)土中培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用EMS誘變創(chuàng)制觀賞鳳梨新品種的方法，其特征在于：所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：MS粉末4.43g/L+蔗糖30g/L+植物凝膠3g/L+BAP 4mg/L+NAA0.2mg/L，pH值為5.8。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用EMS誘變創(chuàng)制觀賞鳳梨新品種的方法，其特征在于：所述EMS-磷酸緩沖液是以磷酸緩沖液為溶劑，將化學誘變劑甲基磺酸乙酯EMS稀釋到體積比濃度0.6%；其中，磷酸緩沖液的摩爾濃度為0.1 mol/L，pH值為5.8。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用EMS誘變創(chuàng)制觀賞鳳梨新品種的方法，其特征在于：所述不定芽誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基配方為MS粉末4.43g/L+蔗糖30g/L+植物凝膠3g/L+BAP 1mg/L+NAA0.2mg/L，pH值為5.8。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用EMS誘變創(chuàng)制觀賞鳳梨新品種的方法，其特征在于：所述生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS粉末4.43g/L+蔗糖30g/L，pH值為5.8。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用EMS誘變創(chuàng)制觀賞鳳梨新品種的方法，其特征在于：所述促根壯苗培養(yǎng)基配方為MS粉末4.43g/L+蔗糖30g/L+植物凝膠3g/L+NAA 0.2mg/L，pH值為5.8。