[發明專利]一種用于抑制心肌肥大的生物源納米硒的制備方法及藥物

在審

• 申請號: 202210620708.1
• 申請日: 2022-06-02
• 公開（公告）號: CN114921500A
• 公開（公告）日: 2022-08-19
• 發明（設計）人: 周東海;符楊;楊小琦;張嘉賓;高蓉;王飛帆;張夢迪
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12P3/00
• 分類號: C12P3/00;C12N1/20;A61K33/04;A61P9/00;G01N21/31;C12R1/085;C12R1/125
• 代理公司: 重慶信必達知識產權代理有限公司 50286
• 代理人: 陳小東

本發明屬于納米硒制備技術領域，公開了一種用于抑制心肌肥大的生物源納米硒的制備方法及藥物，選擇牦牛源、馬源的益生菌并純化；將純化后的益生菌接種至含亞硒酸鈉的LB肉湯中，搖床培養；篩選亞硒酸鈉還原率高、發酵液紅色物質生成量多的菌株；將篩選的還原率高的菌株接種至LB肉湯中進行常規培養；將篩選的還原率較高的菌株在含亞硒酸鈉的LB瓊脂平板上劃線培養，挑取紅色單菌落，得到驗證并篩選出最佳菌株蠟樣芽孢桿菌A3；設置含亞硒酸鈉的LB肉湯中硒含量濃度梯度以及培養時間梯度，選擇得到最高耐受濃度以及最優培養時間，提取納米硒球，進行表征及純度測定。本發明的納米硒有蛋白包被，粒徑小，純度高，穩定性更好。

技術領域

本發明屬于納米硒制備技術領域，尤其涉及一種用于抑制心肌肥大的生物源納米硒的制備方法及藥物。

背景技術

目前：硒(Se)是一種對生物系統有廣泛影響的微量元素，它作為組成谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性中心的重要元素，在清除ROS及其衍生物的細胞抗氧化防御機制中發揮著重要作用。周馳利用生防菌枯草芽孢桿菌和亞硒酸鈉溶液反應，制備了粒徑范圍50～250nm的納米硒；車林利用Acillus cereus CC-1和亞硒酸鈉溶液反應，制備了粒徑范圍100～250nm的納米硒。相較于目前生產中廣泛使用的有機硒(酵母硒、硒代蛋氨酸等)、無機硒(亞硒酸鈉)而言，納米硒具有更高活性、更高安全性、更強抗氧化性的特點。

然而現有的物理源或化學源納米硒容易轉化成黑色或褐色納米硒，且制備過程對環境和生物不友好。

通過上述分析，現有技術存在的問題及缺陷為：現有的物理制備納米硒的方法實驗條件和成本較高，而化學制備納米硒的方法制備過程易對環境造成污染不友好；同時物理方法制備的納米硒容易轉化成黑色或褐色納米硒，從而降低其生物學效應不穩定。蒸發和激光燒蝕技術是儀器方法的例子，通常用于納米粒子的合成。在化學技術中，使用添加劑、溶劑和穩定劑，如硼氫化物、乙胺、十二烷酸酯和許多其他化學物質。這些化學物質不環保，有害，對生物有毒。

解決以上問題及缺陷的意義為：一方面可以降低制作成本，另一方面可以增加其穩定性，并且更加環保。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種用于抑制心肌肥大的生物源納米硒的制備方法及藥物。

本發明是這樣實現的，一種用于抑制心肌肥大的生物源納米硒的制備方法，所述用于抑制心肌肥大的生物源納米硒的制備方法包括：

采用牦牛源的益生菌利用微生物還原法進行納米硒的制備。

進一步，所述用于抑制心肌肥大的生物源納米硒的制備方法包括以下步驟：

步驟一，選擇6株來自牦牛源、馬源的益生菌，并對選擇的6株益生菌進行純化；將純化后的益生菌按1％的接種量接種至含有3、6、12、18、24、30mmol/L 硒元素的LB肉湯培養基中常規培養；

步驟二，根據細菌發酵液的顏色，試管底部的紅色沉淀多少，以及DAB法測量得到的亞硒酸鈉還原率篩選出最佳菌株；

步驟三，將篩選的菌株在含3、6、12、18、24、30mmol/L亞硒酸鈉的LB 瓊脂平板上劃線培養，挑取紅色單菌落，重復3次液體發酵、瓊脂平板劃線，驗證菌株；

步驟四，將選出的菌株按1％的比例接種至含有18、20、22.5、24mmol/L 亞硒酸鈉的LB肉湯中進行濃度篩選。選出最適濃度后，將菌株按1％的比例接種至含有最適濃度亞硒酸鈉的LB肉湯中培養12、24、48、72、96、120h進行時間篩選；

步驟五，將篩選出的菌株在LB肉湯中搖床培養至OD600為0.7時按1％的比例接種至含亞硒酸鈉最佳濃度的LB肉湯中，在37℃，180r/min的條件下培養最適時間；