[發(fā)明專利]一種新型高穩(wěn)定性線粒體熒光探針及其制備方法與應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202210618852.1 | 申請(qǐng)日： | 2022-06-01 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN114907332A | 公開(kāi)（公告）日： | 2022-08-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 程國(guó)輝;陳明慧;王玉鑫;湯武玥 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 徐州醫(yī)科大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C07D409/06 | 分類號(hào)： | C07D409/06;C09K11/06;G01N21/64 |
| 代理公司： | 徐州先卓知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32555 | 代理人： | 陳俊杰 |
| 地址： | 221000 江*** | 國(guó)省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 新型 穩(wěn)定性 線粒體 熒光 探針 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明公開(kāi)一種新型高穩(wěn)定性線粒體熒光探針及其制備方法與應(yīng)用，制備方法包括：1)將4?溴?三苯胺、4?甲酰苯基硼酸、雙三苯基磷二氯化鈀、碳酸鉀混合于30?60mL四氫呋喃中，將混合物在50?65℃攪拌反應(yīng)20?25h，分離；2)將4?甲基吡啶和2?溴乙醇溶于30?50mL乙腈中，75?90℃加熱回流18?30h，減壓除溶劑，再經(jīng)乙醚沉淀；3)將制得的5?(4?(二苯基氨基)苯基)噻吩?2?甲醛、1?(2?羥乙基)?4?甲基吡啶?溴化物和哌啶加入到30?50mL氯仿中，于50?65℃加熱回流反應(yīng)10?15h，經(jīng)乙醚沉淀得到線粒體熒光探針。本發(fā)明能直觀、高效地檢測(cè)線粒體形態(tài)及數(shù)量的變化。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種新型高穩(wěn)定性線粒體熒光探針及其制備方法與應(yīng)用，屬于熒光探針技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
線粒體存在于大多數(shù)真核細(xì)胞中，是細(xì)胞的“能量工廠”，負(fù)責(zé)細(xì)胞能量的供給和儲(chǔ)藏。糖類、脂肪、氨基酸最終在線粒體中被氧化并釋放能量。除了能量供給，線粒體還調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝與增值并控制細(xì)胞程序性死亡，是影響細(xì)胞生理活動(dòng)及病理活動(dòng)的重要細(xì)胞器。因此，線粒體靶向探針的開(kāi)發(fā)具有重要意義。
理想的線粒體靶向探針應(yīng)該在細(xì)胞其他位置不發(fā)射熒光，僅在線粒體部位發(fā)射熒光，實(shí)現(xiàn)線粒體成像。除此之外，線粒體探針還應(yīng)該具有良好的光穩(wěn)定性，在被激發(fā)光激發(fā)后保持高度的穩(wěn)定性。目前已有商業(yè)化的熒光探針，諸如MitoTracker Red FM(MTR)，MitoTracker Green FM(MTG)，TMRM，TMRE和JC-1等，盡管也具有良好的線粒體成像效果，但是在被激發(fā)光照射成像時(shí)往往耐光漂白性較差，僅照射幾分鐘探針會(huì)發(fā)生變形，失去成像能力。因此，需要開(kāi)發(fā)制備程序簡(jiǎn)單、線粒體成像能力好、光穩(wěn)定性強(qiáng)的熒光探針，并適用于活細(xì)胞內(nèi)的線粒體靶向成像。
發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種新型高穩(wěn)定性線粒體熒光探針，能夠高保真度的成像線粒體。
本發(fā)明還提供了所述新型高穩(wěn)定性線粒體熒光探針的制備方法，具有極簡(jiǎn)單的合成工藝，極低的成本，極高的產(chǎn)率。
本發(fā)明還提供了所述新型高穩(wěn)定性線粒體熒光探針的應(yīng)用。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的一種新型高穩(wěn)定性線粒體熒光探針，其結(jié)構(gòu)式為：
另外，本發(fā)明還提供了所述的新型高穩(wěn)定性線粒體熒光探針的制備方法，包括以下步驟：
1)先將4-溴-三苯胺1.5-2g、4-甲酰苯基硼酸1.2-1.8g、雙三苯基磷二氯化鈀0.1-0.5g、碳酸鉀2-5g混合于30-60mL四氫呋喃中，然后將混合物在50-65℃攪拌反應(yīng)20-25h，分離得到5-(4-(二苯基氨基)苯基)噻吩-2-甲醛；
2)將4-甲基吡啶2-3g和2-溴乙醇3-6g溶于30-50mL乙腈中，75-90℃加熱回流18-30h，減壓除溶劑，經(jīng)乙醚沉淀得到1-(2-羥乙基)-4-甲基吡啶-溴化物；
3)將制得的5-(4-(二苯基氨基)苯基)噻吩-2-甲醛1-2g、1-(2-羥乙基)-4-甲基吡啶-溴化物1-2g和哌啶1-3滴加入到30-50mL氯仿中，于50-65℃加熱回流反應(yīng)10-15h，經(jīng)乙醚沉淀得到所述新型高穩(wěn)定性線粒體熒光探針。
作為改進(jìn)，所述步驟1)中4-溴-三苯胺1.8g、4-甲酰苯基硼酸1.5g、雙三苯基磷二氯化鈀0.33g、碳酸鉀3.24g混合于四氫呋喃50mL中。
作為改進(jìn)，所述步驟1)中采用柱層析分離得到5-(4-(二苯基氨基)苯基)噻吩-2-甲醛。
作為改進(jìn)，所述步驟2)中4-甲基吡啶2.5g和2-溴乙醇5g溶于40mL乙腈中。
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