[發(fā)明專利]一種多種抗原特異性T細(xì)胞體外高效擴(kuò)增方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210615659.2
• 申請日: 2022-06-01
• 公開（公告）號: CN114934015A
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 葉永清;黃能平;王力;左鵬舉;伊莉莉;仇宇光
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門三一造血技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/0784
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.本發(fā)明提供一種多種抗原特異性T細(xì)胞體外高效擴(kuò)增方法，其特征在于使用IL-1β、IL-4、IL-7、IL-15、1L-18、IL-21多種細(xì)胞因子組合以及胎盤抗原肽刺激可以在體外獲得多于15種混合CD8+以及CD4+特異性T細(xì)胞，其中獲得CD8+T細(xì)胞比例25-60%，獲得CD4+T比例在32-55%，使用該種方法獲得的混合腫瘤抗原特異性T細(xì)胞為提高腫瘤治療的效果提供一個可能的路徑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用多種細(xì)胞因子組合，其特征在于：所述多種因子組合包括IL-1β、IL-4、IL-7、IL-15、1L-18、IL-21。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用多種細(xì)胞因子組合，其特征在于：所述多種因子組合濃度為IL-1β 10ng/ml ，IL-4 500U/ml，IL-7 50ng /ml， IL-15 20ng/ml IL-18 10ng/ml， IL-21 10ng/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胎盤抗原肽，其特征在于：所述胎盤抗原肽提取自健康產(chǎn)婦足月分娩胎盤。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種多種抗原特異性T細(xì)胞體外高效擴(kuò)增方法，其制備方法包括如下步驟：

步驟一：DC細(xì)胞誘導(dǎo)：使用傳統(tǒng)DC細(xì)胞培養(yǎng)方法，使用GM-CSF，IL-4 TNFα因子從PBMC中誘導(dǎo)DC細(xì)胞；

步驟二： 收集DC細(xì)胞至1ml培養(yǎng)基中，加入500μg 的混合胎盤來源多肽，輕輕吹打混勻，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱孵育4h；

步驟三：將孵育后的DC細(xì)胞懸液加入T細(xì)胞懸液中，加入IL-1β 10ng/ml ，IL-4 500U/ml，IL-7 50ng /ml， IL-15 20ng/ml 1L-18 10ng/ml， IL-21 10ng/ml 輕輕混勻后，加入到T-175培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

步驟四：第6-15天隔天補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基及IL-2 1000U/ml，第15天，收獲廣譜特異性T細(xì)胞。