[發明專利]一種樹突狀細胞體外高效擴增體系

在審

• 申請號: 202210614803.0
• 申請日: 2022-06-01
• 公開（公告）號: CN114934016A
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 葉永清;黃能平;楊麗秋
• 申請（專利權）人: 廈門三一造血技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0784
• 分類號: C12N5/0784
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于細胞培養技術領域，尤其為一種樹突狀細胞體外高效擴增體系，其特征在于使用特定因子組合I從外周血單個核細胞中直接擴增DC前體細胞，再使用特定因子組合II從DC前體細胞中生成大量功能性DC細胞。特定因子組合I包括以IMDM作為基礎培養基加入5 ng/mL SCF、20nM hydrocortisone、10ng/mLIL?6、5ng/mL Flt?3L、5ng/mLIL?1β、20ng/mL GM?CSF以及帕洛沙姆10μg/ml。特定因子組合II包括以F12/DMEM作為基礎培養基加入0.5μg/mL PGE2以及20ng/mL TNF?α。本發明申請能夠從1ml全血中經過體外培養獲得2~5x10^7 DC細胞，為解決臨床治療使用DC細胞數量不足提供一種可行的解決方案。

技術領域

本發明屬于細胞培養技術領域，具體涉及一種樹突狀細胞體外高效擴增體系。

背景技術

樹突狀細胞（DC細胞）作為專職抗原呈遞細胞，能攝取、加工及呈遞抗原，處于啟動、調控、并維持免疫應答的中心環節。體外誘導DC細胞是將人外周血單核細胞在體外用多種細胞因子如抗GM-CSF、IL-4、等共同培養，再使用TNFα等因子激發DC細胞逐漸成熟，表達CD80\CD83\CD86分子,通過皮下、淋巴結注射進入病人體內，成熟DC細胞將抗原信息呈遞給T細胞，通常情況下，體內表達某一特異性TCR的T細胞克隆僅占總T細胞庫的1/10⁴-1/10⁵。數量極少的特異性T細胞僅在被抗原激活后，通過克隆擴增而產生大量效應細胞，才能有效發揮作用。

現有的DC細胞培養主要系外周血單個核細胞在特定誘導條件下分化而成，數量通常為每毫升外周血可以得到1x10^5 DC細胞，對于一次治療量約為1x10^7 DC數量顯然現有的DC細胞獲得方式無法滿足臨床需求，為解決上述問題，本申請中提出一種樹突狀細胞體外高效擴增體系，能夠從1ml全血中經過體外培養獲得2~5x10^7 DC細胞，為解決臨床治療使用DC細胞數量不足提供一種可行的解決方案。

發明內容

本發明提供一種DC細胞體外高效擴增體系，用以解決現有技術中的缺陷。

本發明通過以下技術方案予以實現：

本發明使用特定因子組合I從外周血單個核細胞中直接擴增DC前體細胞，再使用特定因子組合II從DC前體細胞中生成大量功能性DC細胞。特定因子組合I包括：以IMDM作為基礎培養基加入5 ng/mL SCF、20nM hydrocortisone、 10ng/mLIL-6、 5ng/mL Flt-3L、5ng/ mLIL-1β、20ng/mL GM-CSF以及帕洛沙姆10μg/ml。特定因子組合II包括：以F12/DMEM作為基礎培養基加入0.5μg/mL PGE2以及20ng/mL TNF-α。具體培養步驟如下：

步驟一: 分離PBMC細胞，以1.5x10^6/ml 細胞加入含有組份I的培養基；

步驟二：每隔3-5天根據細胞生長狀況補加等倍新鮮培養基；

步驟三：培養第10天，300g 10min離心洗滌收獲細胞后，加入組份II培養基持續培養至15天；

步驟四：收獲DC細胞，分析生長動力學、表面抗原表達、內吞能力、混合淋巴細胞反應、特異性細胞因子分泌等指標，對擴增DC進行表征。

本發明的優點是：現有的DC細胞培養主要系外周血單個核細胞在特定誘導條件下分化而成，數量通常為每ml外周血可以得到1x10^5 DC細胞，對于一次治療量約為1x10^7DC數量顯然現有的DC細胞獲得數量無法滿足臨床需求，本申請提出的一種樹突狀細胞體外高效擴增體系，能夠從1ml全血中經過體外培養獲得2~5x10^7 DC細胞，為解決臨床治療使用DC細胞數量不足提供一種可行的解決方案。

附圖說明