[發明專利]一種NMDAR NR1亞基、NMDAR的突變體及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 202210607540.0
• 申請日: 2022-05-31
• 公開（公告）號: CN114957445B
• 公開（公告）日: 2023-09-19
• 發明（設計）人: 李科;趙子越;閆亞平;程靜美;郝文斌;封雪
• 申請（專利權）人: 陜西脈元生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C12N15/12;C12N15/11;C12N15/10;C12N15/85;C12Q1/6883;A61K38/17;A61P25/00;A61P25/08;A61P25/28
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

本發明提供了一種NMDARNR1亞基、NMDAR的突變體及其構建方法和應用，涉及生物醫藥技術領域。本發明所述NMDARNR1亞基突變體不識別抗NMDAR腦炎患者中的自身抗體，但當其與NMDAR的NR2亞基共轉時，表現出了與野生型NR1相同的鈣內流功能，從而為NMDAR相關疾病在基因水平上的診斷治療提供了重要的方向，包括用于替換障礙型NMDAR離子通道、治療致病性抗體導致的突出后膜表面NMDAR減少導致的疾病等相關性疾病。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種NMDAR?NR1亞基、NMDAR的突變體及其構建方法和應用。

背景技術

NMDAR是一種分布在神經細胞突觸后膜表面的離子通道蛋白，是離子型谷氨酸受體的亞型之一，由NR1、NR2和NR3亞單位構成。在有功能活性的NMDAR中，其4個亞基至少應有1個NR1及1個NR2，而絕大多數的NMDAR由2個NR1及2個NR2組成，也有少部分由3種亞基共同組成。NMDA受體有復雜的分子結構和獨特的藥理學特性，它對鈣離子具有高通透性，這使得NMDA受體在突觸可塑性及興奮毒性方面具有重要作用。當神經遞質與NMDAR結合后，功能性NMDAR離子通道打開，Ca²⁺內流，繼而觸發一系列的生化反應，可促進學習和記憶的功能；但過量的Ca²⁺內流會導致神經元壞死，引起學習記憶障礙。人類各種神經退行性和神經精神疾病的發病機制和病理生理過程可能與NMDAR通道故障相關，因此，對NMDAR通道的研究可為治療性藥物的開發提供靶點。

抗NMDAR腦炎是最主要的一種自身免疫性腦炎，占自身免疫性腦炎患者的70％～80％。NMDAR腦炎患者中主要存在的是針對NMDAR的NR1亞基的特異性IgG抗體。這些抗體具有致病性，可誘導NMDA受體的交聯和內化，并阻斷NMDAR依賴的突觸電活動，引起癲癇、精神行為異常和意識障礙等臨床表現。有研究表明，抗NMDAR腦炎患者的抗體會抑制NMDAR依賴性的細胞內Ca²⁺流入(Ignacio?R?A,Josep?D,Teresa?S,et?al.Isolated?hemidystoniaassociated?with?NMDA?receptor?antibodies[J].Movement?disorders:officialjournal?of?the?Movement?Disorder?Society,2011,26(2):351)。因此，維持NMDAR依賴性的細胞內Ca²⁺流入，對Ca²⁺介導的生理生化反應極為重要。

另有研究表明，在激活NMDAR通道而不是其他Ca²⁺通道(包括紅藻氨酸受體和電壓敏感Ca²⁺通道)后，鈣很容易進入線粒體。Ca²⁺向線粒體轉運的抑制保護神經元免受谷氨酸(Glu)介導的細胞死亡。Fukumori等人通過人胚胎腎(HEK)-293細胞制備獲得性NMDAR通道，證明線粒體解偶聯蛋白-2(UCP2)可能在一定程度上參與了細胞功能和/或功能障礙，其機制與激活功能性NMDAR通道后調節線粒體游離Ca²⁺水平有關(Fukumori?R,Takarada?T,Kambe?Y,et?al.Possible?involvement?of?mitochondrial?uncoupling?protein-2incytotoxicity?mediated?by?acquired?N-methyl-D-aspartate?receptor?channels[J].Neurochemistry?international,2012,61(4):498-505)。因此，NMDAR通道鈣內流功能的研究對NMDAR相關疾病的診斷治療具有重要的意義。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種NMDAR?NR1亞基、NMDAR的突變體及其構建方法和應用，所述NMDAR?NR1亞基突變體不識別抗NMDAR腦炎患者中的自身抗體，但當其與NMDAR的NR2亞基共轉時，表現出了與野生型NR1相同的鈣內流功能，從而為NMDAR相關疾病在基因水平上的診斷治療提供了重要的方向。