[發(fā)明專(zhuān)利]耐乙醇片球菌及其活化方法、菌劑及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210598849.8
• 申請(qǐng)日: 2022-05-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114752539B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-03-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高鴻;李雨萌;吳艷萍;鐘凱;黃毅娜
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;C12N1/04;A23L29/00;A23L19/20;C12R1/01
• 代理公司: 成都欣圣知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51292
• 代理人: 王海文

1.一種耐乙醇片球菌（Pediococcus ethanolidurans）M1117，其保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為：CCTCC No. M 2022210。

2.一種如權(quán)利要求1所述耐乙醇片球菌M1117的活化方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟S1. 將耐乙醇片球菌M1117采用劃線法，在MRS瓊脂固體培養(yǎng)基上接種，并在30~45℃條件下，于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36~48h，獲得單菌落；

步驟S2. 將單菌落接種在MRS肉湯培養(yǎng)基中，于30~45℃、100~220r/min條件下，振蕩培養(yǎng)18~36h，活化，得到耐乙醇片球菌M1117培養(yǎng)液。

3.一種菌劑，其特征在于，所述菌劑包含權(quán)利要求1所述的耐乙醇片球菌M1117。

4.一種如權(quán)利要求3所述菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟S1. 將耐乙醇片球菌M1117培養(yǎng)液在 6000~15000 r/min、4℃條件下，離心10~20min，棄上清液，收集菌體；

步驟S2. 在菌體中加入凍干保護(hù)劑，混合均勻，置于-15~-25℃預(yù)凍10~24h，然后真空冷凍干燥，得到直投式菌劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的菌劑的制備方法，其特征在于，所述步驟S1中，所述耐乙醇片球菌M1117培養(yǎng)液的濃度為10⁷~10⁹CFU/mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的菌劑的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中，所述凍干保護(hù)劑以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，包括：5~10%脫脂乳粉、3~8%海藻糖、3~8%蔗糖、2~5%甘油，余量為水。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的菌劑的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中，所述菌體與凍干保護(hù)劑的質(zhì)量體積比為1:3~8。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的菌劑在泡菜中的應(yīng)用。

9.一種泡菜的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟S1. 取無(wú)病蟲(chóng)害的新鮮辣椒，洗凈、自然風(fēng)干，備用；

步驟S2. 將玻璃壇用沸水滅菌10~30min，然后加入冷卻開(kāi)水，再加入5~10g/L冰糖和50~70g/L泡菜鹽；

步驟S3. 待冰糖、泡菜鹽溶解后，依次加入10~50g/L生姜、10~50g/L大蒜和1~3g/L花椒，得到泡菜鹵水；

步驟S4. 在無(wú)菌超凈工作臺(tái)里，將權(quán)利要求1所述耐乙醇片球菌M1117制備得到的菌劑接種到泡菜鹵水中；

步驟S5. 將辣椒以質(zhì)量比1:3~5放入泡菜鹵水中，再加入泡菜鹵水體積分?jǐn)?shù)1~3%的白酒；

步驟S6. 將玻璃壇放置于20~30℃恒溫培養(yǎng)箱中，連續(xù)密封發(fā)酵8~15天，得到低亞硝酸鹽泡菜。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的泡菜的制備方法，其特征在于，所述步驟S4中，所述菌劑的接種量為辣椒重量的1~3%。