[發明專利]一種微生物菌落總數限度檢測方法

在審

• 申請號: 202210598465.6
• 申請日: 2022-05-30
• 公開（公告）號: CN114752649A
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 儲團結
• 申請（專利權）人: 藥科國信（浙江）質量技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;C12M1/34;C12M1/26;C12M1/24;C12M1/12;C12M1/00
• 代理公司: 杭州卓然專利代理事務所(普通合伙) 33422
• 代理人: 馮笑男

本發明公開了一種微生物菌落總數限度檢測方法，涉及微生物限度檢驗技術領域，包括以下步驟：步驟一：將檢測使用的新型試管、鑷子、量筒、吸頭等器具進行滅菌處理；步驟二：現取100ml pH7.0無菌氯化鈉?蛋白胨緩沖液加入到一個所述新型試管中，再取供試品10g加入，最后進行混勻靜置，制成1∶10的供試品勻液；本發明通過利用新型試管制備供試品勻液，能有效的防止環境中的菌種進入到試管中污染供試品勻液，從而導致檢測準確性大大降低，同時利用內置無菌膜在混勻靜置時通過所述無菌濾膜落入試管下側，從而形成過濾，從而大大降低了供試品勻液被污染的概率，同時提高了最后檢測的準確性。

技術領域

本發明涉及微生物限度檢驗技術領域，具體為一種微生物菌落總數限度檢測方法。

背景技術

微生物限度檢查法系檢查非無菌制劑及原料、輔料受微生物污染程度的方法,檢查項目包括需氧菌總數、霉菌數和酵母菌總數的檢查。微生物限度檢查應在環境潔凈度不低于D級下的局部B級的單向流空氣區域內進行，檢查的全部過程應嚴格遵守無菌操作，防止微生物再污染；

但是目前的微生物限度檢測方法過程中檢測試品極容易被污染，從而使得檢測結果不準確。

發明內容

本發明的目的在于提供一種微生物菌落總數限度檢測方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種微生物菌落總數限度檢測方法，包括以下步驟：

步驟一：將檢測使用的新型試管、鑷子、量筒、吸頭等器具進行滅菌處理；

步驟二：現取100ml pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液加入到一個所述新型試管中，再取供試品10g加入，最后進行混勻靜置，制成1∶10的供試品勻液；

步驟三：重新取一所述新型試管加入9ml pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，再加入所述步驟一中的1∶10的供試品勻液1ml，進行混勻靜置，制成1∶10²的供試品勻液。

步驟四：重新取一所述新型試管加入9ml pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，再加入所述步驟二中的1∶10²的供試品勻液1ml，進行混勻靜置，制成1∶10³的供試品勻液；

步驟五：取所述步驟二、所述步驟三、所述步驟四中的供試品勻液各1ml置直徑90mm的無菌平皿中，注入約20ml 45℃的胰酪大豆胨瓊脂培養基或沙氏葡萄糖瓊脂培養基，混勻，凝固，倒置培養；

步驟六：另取pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液1ml，置無菌平皿中，注入培養基，凝固，倒置培養。

作為優選，所述步驟一中采用125～130℃條件下的蒸汽進行滅菌，且時間在60分鐘。

作為優選，所述步驟五中三份供試品勻液在制備完成后45分鐘內加入到胰酪大豆胨瓊脂培養基或沙氏葡萄糖瓊脂培養基中，能有效的保證檢測結果的準確性。

作為優選，所述新型試管包括玻璃管體，所述玻璃管體中設置有試管內腔，所述試管內腔內固設有無菌濾膜，所述試管內腔下側出液處設置有引流圓球，所述玻璃管體上側外端面固定設置有兩個導入管。

作為優選，兩個所述導入管關于所述玻璃管體中心線呈左右對稱分布，每個所述導入管靠近所述試管內腔中心線方向端面均貫穿進入所述試管內腔中，每個所述導入管中間段均呈螺旋狀，從而使得在制備供試品勻液能有效的防止環境中的菌種進入到試管中污染供試品勻液，從而導致檢測準確性大大降低。

作為優選，所述步驟五中每個稀釋級每種培養基制備兩個平板。

作為優選，所述步驟六中每種計數用的培養基各制備兩個平板，作為陰性對照，陰性對照不得有菌生長。

作為優選，所述步驟五與所述步驟六中倒置培養時間相同，且時間區間為6天。