[發(fā)明專利]來源于腫瘤患者胸腹水的具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細(xì)胞及其制備方法和細(xì)胞制劑

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210595591.6
• 申請日: 2022-05-30
• 公開（公告）號: CN114672458A
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳學(xué)濤;陳曉波;王小宇;韓洪起;馮春玲
• 申請（專利權(quán)）人: 優(yōu)賽醫(yī)療科技（天津）有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 天津市尚儀知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 12217
• 代理人: 孫喬喬

1.一種來源于腫瘤患者胸腹水的具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細(xì)胞的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1.將胸腹水樣本離心、洗滌，用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并計數(shù)；

S2.取2.0-3.0×10⁷個步驟S1獲得的細(xì)胞加入到預(yù)先包被的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，加入完全培養(yǎng)基至細(xì)胞終濃度0.4-0.6×10⁹/L，補(bǔ)加IFN-γ至終濃度500-2000IU/mL，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；細(xì)胞培養(yǎng)瓶預(yù)先包被的方法為：用含有CD3和CD28單抗的T淋巴細(xì)胞完全培養(yǎng)基包被培養(yǎng)瓶置于37℃，5.0% CO₂條件下0.5-1 h；

S3.培養(yǎng)24h-48h后，取細(xì)胞懸液計數(shù)，將其余細(xì)胞懸液全部轉(zhuǎn)移至預(yù)先包被的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，細(xì)胞培養(yǎng)瓶包被方法同步驟S2；根據(jù)計數(shù)結(jié)果，補(bǔ)加完全培養(yǎng)基將細(xì)胞濃度調(diào)整為0.4-0.6×10⁹/L，補(bǔ)加IFN-γ至終濃度500-2000IU/mL，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；

S4.每日觀察細(xì)胞狀態(tài)，每間隔24h取細(xì)胞懸液計數(shù)，根據(jù)細(xì)胞計數(shù)補(bǔ)加完全培養(yǎng)基將細(xì)胞濃度調(diào)整至0.4-0.6×10⁹/L，進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)；

S5.當(dāng)培養(yǎng)體系總體積為180-200mL時，取細(xì)胞懸液計數(shù)，將其余細(xì)胞懸液全部轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)袋中，根據(jù)細(xì)胞計數(shù)補(bǔ)加完全培養(yǎng)基將細(xì)胞濃度調(diào)整至0.4-0.6×10⁹/L，按照20-50ng/mL向培養(yǎng)袋中補(bǔ)加CD3和CD28單抗，繼續(xù)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；

S6.每日觀察細(xì)胞狀態(tài)，每間隔24h取細(xì)胞懸液計數(shù)，根據(jù)細(xì)胞計數(shù)補(bǔ)加完全培養(yǎng)基將細(xì)胞濃度調(diào)整至0.4-0.6×10⁹/L，進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)；

S7.當(dāng)培養(yǎng)體系終體積達(dá)到1.6-2.0 L時，每日進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，直到細(xì)胞濃度增至2.0-2.5×10⁹/L時，回收全部細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種來源于腫瘤患者胸腹水的具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細(xì)胞的制備方法，其特征在于：所述完全培養(yǎng)基為含有10-20 v%胎牛血清、4000-6000IU/mL白細(xì)胞介素2和2 v% 50X必需氨基酸的X-VIVO 15培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種來源于腫瘤患者胸腹水的具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細(xì)胞的制備方法，其特征在于：步驟S2、S3中，CD3和CD28兩種單抗的含量為20-50ng/cm²。

4.一種權(quán)利要求1-3任一所述制備方法制備得到的來源于腫瘤患者胸腹水的具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細(xì)胞。

5.一種治療惡性胸腹腔積液的細(xì)胞制劑，其特征在于：包括權(quán)利要求4所述的來源于腫瘤患者胸腹水的具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細(xì)胞。