[發明專利]來源于腫瘤患者胸腹水的具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細胞及其制備方法和細胞制劑

在審

• 申請號: 202210595591.6
• 申請日: 2022-05-30
• 公開（公告）號: CN114672458A
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 吳學濤;陳曉波;王小宇;韓洪起;馮春玲
• 申請（專利權）人: 優賽醫療科技（天津）有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 天津市尚儀知識產權代理事務所(普通合伙) 12217
• 代理人: 孫喬喬

本發明公開了一種來源于腫瘤患者胸腹水的具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細胞及其制備方法和細胞制劑。本申請通過分離篩選腫瘤患者胸腹水內的腫瘤特異性T淋巴細胞，并對符合要求的種子細胞進行擴增培養，經CD3和CD28、IFN?γ等因子直接刺激，在短時間內即可獲得具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細胞。本申請將腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細胞的培養周期從傳統方式的25天左右縮短至11?16天，而且所得的具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細胞在快速達到臨床治療數量級的同時也保證所需T淋巴細胞的純度和殺傷活性。

技術領域

本發明涉及T淋巴細胞制劑領域，特別涉及一種來源于腫瘤患者胸腹水的具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細胞及其制備方法和細胞制劑。

背景技術

惡性腫瘤是威脅人類健康的疾病之一。根據國際癌癥研究機構(IARC)發布的全球癌癥統計數據，2020年全球新發惡性腫瘤1930萬例(不計非黑色素瘤皮膚癌為1810萬例),全球惡性腫瘤死亡病例約為1000萬例(不計非黑色素瘤皮膚癌為990萬例)，是世界范圍內主要死亡原因。惡性腫瘤己經成為我國主要公共衛生問題，自2010年來，惡性腫瘤已經超過心腦血管疾病，成為中國人群第一大死因。惡性胸腹水又稱惡性胸腔積液，是晚期惡性腫瘤常見的并發癥，威脅著患者的生命安全，影響患者的生活質量。

正常人體內，胸腹腔和心包腔內僅有少量液體發揮潤滑功能，一般情況下胸腔內的液體量＜200mL，腹腔內的液體量＜50mL即可維持正常的心肺功能。當胸腹腔出現惡性腫瘤細胞浸潤或炎癥時，腔內積液就會增多，并且逐漸積聚，積液的性質也隨之發生變化。近年來，我國惡性腫瘤的發病率逐年攀升，惡性胸腹腔積液病例也日漸增多。

腫瘤浸潤淋巴細胞(tumor-infiltrating lymphocyte, TIL)是存在于腫瘤間質內的以淋巴細胞為主的異質性淋巴細胞群體，大多聚集在腫瘤周圍或其間質呈套狀圍繞癌巢。其主要成分是存在于腫瘤間質內的T淋巴細胞，即具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細胞，小部分為MHC非限制性的NK細胞，其共同特征為表達T細胞受體(T cell receptor,TCR)。TIL細胞治療腫瘤是當前腫瘤生物學治療研究的熱點之一。TIL 細胞的優點是：1.具有較強的抗腫瘤作用；2.可特異識別自體腫瘤, 具有特異的MHC限制性溶解腫瘤活性；3.除對腫瘤細胞有直接殺傷作用外，回輸后TIL細胞還能增強患者的抗腫瘤免疫功能從而提高療效。

臨床所見的大量胸腔積液大約40%是由惡性腫瘤引起，最常見的為肺癌、乳腺癌和淋巴瘤，此時患者已不具備手術治療的條件，而全身的化療、放療使耐受性較差的患者難以承受。自體TIL細胞過繼免疫療法是近年發展起來治療惡性胸腔積液的較為成熟、有效且低毒的方法。惡性胸腔積液中的淋巴細胞是一種特殊形式的TIL細胞，其特點是可對自體內生長的實體瘤進行特異性殺傷，而對其他種類腫瘤和正常組織細胞則無殺傷作用。

腫瘤進展與腫瘤中CD8⁺T淋巴細胞浸潤之間存在相關性，CD8⁺T細胞被認為直接參與抗腫瘤細胞毒性反應。Ahrends等認為CD4⁺T細胞幫助細胞毒性T細（CTL）表達細胞毒性效應分子，抑制受體下調和增加遷移能力。有報道顯示，癌癥組織內浸潤的CD8⁺細胞的數量與患者預后呈正相關，其數量越多，預后就越好。

綜上，申請人認為分離篩選腫瘤患者胸腹水內的腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細胞并對符合要求的種子細胞進行擴增培養，快速獲得臨床治療數量的特異性T淋巴細胞具有重要的意義。

發明內容

本發明為了解決上述技術問題，提供了一種來源于腫瘤患者胸腹水的具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細胞及其制備方法和細胞制劑。

第一方面，本發明提供一種來源于腫瘤患者胸腹水的具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細胞的制備方法，是通過以下技術方案得以實現的。

一種來源于腫瘤患者胸腹水的具有腫瘤特異性殺傷效果的T淋巴細胞的制備方法，包括以下步驟：