[發明專利]一種表面展示新冠病毒RBD蛋白的類病毒樣顆粒及其制備與應用

在審

• 申請號: 202210594005.6
• 申請日: 2022-05-27
• 公開（公告）號: CN114752616A
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 蔡雪飛;盧卉雙
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/62;C12N1/21;A61K39/215;A61P31/16;C12R1/19
• 代理公司: 重慶渝之知識產權代理有限公司 50249
• 代理人: 彭周

本發明屬于醫藥技術領域，具體公開了一種表面展示新冠病毒RBD蛋白的類病毒樣顆粒及其制備與應用。本發明將HBc?VLPs用作展示異源抗原的疫苗載體，把RBD抗原插入乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的主要免疫顯性區域(MIR)，構建的融合蛋白在原核細胞中自組裝形成二十面體對稱結構的病毒樣顆粒VLPs，RBD抗原暴露顆粒的外表面，形成排列密集及重復的抗原表位，誘導機體產生較強的免疫應答反應。本發明將為新冠病毒SARS?CoV?2疫苗的研究和篩選奠定重要的基礎。

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，特別是涉及一種表面展示新冠病毒RBD蛋白的類病毒樣顆粒及其制備與應用。

背景技術

病毒樣顆粒(VLPs)是由病毒結構蛋白自組裝形成的一種納米級蛋白顆粒。目前，用于預防乙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、人乳頭瘤病毒和豬圓環病毒2型等的重組VLPs納米疫苗已經上市，已經成為疫苗研究的熱點。VLPs作為疫苗主要有如下優勢：1、因不含病毒核酸，相比傳統的疫苗更加安全；2、顆粒表面排列密集及重復的抗原表位可誘導機體產生高效持久的體液免疫應答；3、VLPs的顆粒形態有利于抗原提呈細胞的高效攝取，促進Dcs的成熟和遷移；4、經過抗原提呈細胞處理后的VLP呈遞給MHC分子，從而激活CD8+T細胞和CD4+Th細胞，有效誘發不同的免疫應答。

乙肝病毒核心抗原(HBcAg)已經成為常用的VLP平臺的載體并展示了較多病毒來源的外源序列，如：口蹄疫病毒，漢坦病毒核衣殼蛋白，人乳頭瘤病毒，HIV-1等。HBcAg主要有以下幾個特點：1、具有自組裝能力，在插入外源基因時，攜帶外源序列的HBcAg仍然能夠進行自組裝；2、具有高免疫原性，HBcAg既是T細胞依賴性抗原，又是T細胞非依賴性抗原，是HBV所有的蛋白中引起免疫應答最強的蛋白；3、在同源或異源表達系統中均能正確組裝成VLPs，如在酵母以及細菌和植物表達系統，昆蟲細胞等中都能有效表達。

SARS-CoV-2屬于β-冠狀病毒，直徑60-140nm，是目前已知的第7種可引起人類感染的新型冠狀病毒。SARS-CoV-2病毒表面的棘突蛋白通過S1上的C端受體結合域(Receptorbinding domain，簡稱RBD)蛋白與跨膜蛋白血管緊張素轉化酶2(ACE2)結合感染宿主細胞，因此新型冠狀病毒S蛋白介導的受體識別是入胞的關鍵步驟，且體內產生的中和抗體大部分以RBD為靶點。

基于此，若能以HBc-VLPs作為展示新冠病毒RBD蛋白的疫苗載體，將為后續疫苗的研究及篩選奠定重要的基礎。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種表面展示新冠病毒RBD蛋白的類病毒樣顆粒及其制備與應用，為新冠病毒SARS-CoV-2疫苗的研究和篩選奠定重要的基礎。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明第一方面提供一種表面展示新冠病毒RBD蛋白的類病毒樣顆粒的制備方法，將新冠病毒SARS-CoV-2RBD抗原插入乙肝病毒核心抗原HBcAg的免疫顯性區MIR，即乙肝病毒核心抗原HBcAg氨基酸編碼序列的第79和80位之間或第79和81位之間，構建得到HBc-RBD融合蛋白，將HBc-RBD融合蛋白在原核細胞中自組裝形成二十面體對稱結構的病毒樣顆粒VLPs，RBD抗原暴露在所述病毒樣顆粒VLPs的外表面；RBD、HBc氨基酸序列分別如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示，HBc-RBD氨基酸序列如SEQ IDNO.3或SEQ ID NO.4所示。

進一步，所述融合蛋白中RBD的兩端通過柔性linker(G4S)3與HBc連接。linker(G4S)3為GGGGSGGGGSGGGGS。