[發(fā)明專利]一種表面展示新冠病毒RBD蛋白的類病毒樣顆粒及其制備與應用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210594005.6
• 申請日: 2022-05-27
• 公開（公告）號: CN114752616A
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發(fā)明（設計）人: 蔡雪飛;盧卉雙
• 申請（專利權）人: 重慶醫(yī)科大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/62;C12N1/21;A61K39/215;A61P31/16;C12R1/19
• 代理公司: 重慶渝之知識產(chǎn)權代理有限公司 50249
• 代理人: 彭周

1.一種表面展示新冠病毒RBD蛋白的類病毒樣顆粒的制備方法，其特征在于，將新冠病毒SARS-CoV-2RBD抗原插入乙肝病毒核心抗原HBcAg的免疫顯性區(qū)MIR，即乙肝病毒核心抗原HBcAg氨基酸編碼序列的第79和80位之間或第79和81位之間，構建得到HBc-RBD融合蛋白，將HBc-RBD融合蛋白在原核細胞中自組裝形成二十面體對稱結(jié)構的病毒樣顆粒VLPs，RBD抗原暴露在所述病毒樣顆粒VLPs的外表面；RBD、HBc氨基酸序列分別如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示，HBc-RBD氨基酸序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示。

2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述融合蛋白中RBD的兩端通過柔性linker(G4S)3與HBc連接。

3.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于：將HBc-RBD融合蛋白序列的5’和3’端設計添加NdeⅠ和XhoⅠ限制性內(nèi)切酶位點，采用NdeⅠ和XhoⅠ限制性內(nèi)切酶雙酶切含HBc-RBD融合基因的載體和pET28a(+)原核表達載體后，酶切產(chǎn)物純化后獲得目的序列和線性化的pET28a(+)載體，用T4 DNA連接酶連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌，培養(yǎng)后提取得到重組質(zhì)粒；將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌，經(jīng)培養(yǎng)獲得表達HBc-RBD融合蛋白的菌種；用自誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)表達融合蛋白的菌種，經(jīng)處理后獲得純化的HBc-RBD融合蛋白單體，純化的HBc-RBD融合蛋白單體在組裝緩沖液中自組裝形成類病毒樣顆粒。

4.根據(jù)權利要求1～3任一項所述的方法制備得到的類病毒樣顆粒。

5.根據(jù)權利要求1～3任一項所述的方法制備得到的HBc-RBD融合蛋白。

6.一種重組質(zhì)粒，其特征在于：包含權利要求5所述的HBc-RBD融合蛋白。

7.根據(jù)權利要求6所述的重組質(zhì)粒，其特征在于：所述重組質(zhì)粒以pET28a(+)載體為表達載體。

8.一種表達權利要求5所述的HBc-RBD融合蛋白的基因工程菌。

9.根據(jù)權利要求8所述的基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌為大腸埃希菌。

10.根據(jù)權利要求4所述的類病毒樣顆粒、根據(jù)權利要求5所述的HBc-RBD融合蛋白、根據(jù)權利要求6～7任一項所述的重組質(zhì)粒、根據(jù)權利要求8～9任一項所述的基因工程菌在制備新冠病毒SARS-CoV-2疫苗、檢測試劑、預防或治療藥物中的應用。