[發明專利]一種番茄SlHSP17.7基因的應用

在審

• 申請號: 202210587325.9
• 申請日: 2022-05-25
• 公開（公告）號: CN114807173A
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 姜晶;吳媛媛;劉欣;常晨亮;羅珺峰
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/84;C12N15/66;C07K14/415;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 西安匯恩知識產權代理事務所(普通合伙) 61244
• 代理人: 張偉花

本發明提供了一種番茄SlHSP17.7基因的應用，番茄SlHSP17.7基因在番茄植株中過表達，用于提高番茄耐低溫性；番茄SlHSP17.7基因的cDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本發明SlHSP17.7基因在番茄植株中過表達，用于提高番茄耐低溫性。

技術領域

本發明屬于番茄抗耐溫技術領域，具體涉及一種番茄SlHSP17.7基因的應用。

背景技術

番茄(Solanum lycopersicum Mill.)是一種重要的蔬菜作物，在世界各地都有栽培。番茄對低溫敏感。已有研究表明，當溫度低于10℃時，番茄的生長發育受到阻礙(Lyons1973)。低溫條件下，番茄果實發育緩慢，畸形果增多，外觀品質和營養品質顯著下降(Zhenget al.，2002)。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于針對上述現有技術的不足，提供一種番茄SlHSP17.7基因的應用，該番茄SlHSP17.7基因在番茄植株中過表達，用于提高番茄耐低溫性。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：一種番茄SlHSP17.7基因的應用，

所述番茄SlHSP17.7基因在番茄植株中過表達，用于提高番茄耐低溫性；所述番茄SlHSP17.7基因的cDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

優選地，所述番茄SlHSP17.7基因在番茄植株中過表達的方法為：

S1、用引物OE17.7-F和引物OE17.7-R對番茄番茄SlHSP17.7基因的cDNA進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；

所述PCR擴增的反應體系為：番茄番茄SlHSP17.7基因的cDNA 1μL、10μmol/L的引物OE17.7-F 1μL、10μmol/L的引物OE17.7-R 1μL、2×Fast Pfu Master Mix 10μL(2倍高保真Pfu反應混合液)、ddH₂O 7μL；

所述PCR擴增的反應程序為：94℃3min；94℃30s，58℃45s,72℃30s,33個循環；72℃延伸10min；

所述引物OE17.7-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述引物OE17.7-R的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

S2、用限制性內切酶BglII和限制性內切酶BstEII對pCAMBIA3301質粒進行雙酶切，將酶切產物用1％瓊脂糖凝膠分離，切下9266bp大小的條帶，用DNA凝膠回收試劑盒回收產物，得到BglII/BstEII雙酶切pCAMBIA3301質粒的回收產物；

所述雙酶切的反應體系為：10×Tango buffer 4μL、限制性內切酶BglII1μL、限制性內切酶BstEII 1μL、pCAMBIA3301質粒1μL、ddH₂O 13μL；

所述雙酶切的酶切條件為：37℃2.5h,65℃20min；

S3、用重組連接酶將S1中得到的PCR擴增產物中的目的基因片段連接到S2中得到的BglII/BstEII雙酶切pCAMBIA3301質粒的回收產物中，得到連接產物，將所述連接產物轉化至大腸桿菌DH5α感受態細胞中,得到重組質粒pCAMBIA3301-Sl-sHSP17.7；

S4、將S3中得到的重組質粒pCAMBIA3301-Sl-sHSP17.7轉化農桿菌，侵染萌發10天的番茄子葉及下胚軸，然后經過抑菌培養、生芽培養、生根培養，得到過表達植株；

S5、過表達陽性植株的鑒定：用引物BlpR-F和引物BlpR-R對S4中得到的過表達植株進行PCR鑒定，能擴增出為244bp片段的為過表達陽性植株；