[發明專利]一種提高普那霉素產量的發酵方法

在審

• 申請號: 202210584384.0
• 申請日: 2022-05-26
• 公開（公告）號: CN114807275A
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 鄒淵博;萬婷婷;陳晨;周淼軍;李露軍;沈雅文;楊俊杰
• 申請（專利權）人: 海正藥業（杭州）有限公司;浙江海正藥業股份有限公司
• 主分類號: C12P21/04
• 分類號: C12P21/04;C12P17/18;C12N1/38;C12N1/20;C12R1/465
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種提高普那霉素產量的發酵方法，所述方法包括：在發酵培養過程中，向發酵培養基中補加正丙醇。本發明實現了普那霉素產量的大幅提升，降低了生產成本，有利于工業化生產。

技術領域

本發明涉及微生物發酵領域，具體涉及一種提高普那霉素產量的發酵方法。

背景技術

普那霉素(pristinamycins)屬鏈陽性菌素類抗生素，于1955年從始旋鏈霉菌(Streptomyces pristinaespiralis)中分離得到，由約30％普那霉素I和70％普那霉素II組成。其中普那霉素I是由普那霉素IA、普那霉素IB、普那霉素IC組成的環六肽內酯，普那霉素II是由普那霉素IIA和普那霉素IIB組成的多不飽和內酯。普那霉素IA和普那霉素IIA是普那霉素的主要組分。

普那霉素對革蘭陽性菌具有較強的殺菌活性，主要用于治療由革蘭陽性菌包括耐藥菌引起的感染。然而天然的普那霉素水溶性差，不易制成腸外制劑，因此臨床應用受到限制。天然的普那霉素IA和IIA經過化學修飾得到水溶性衍生物RP59500(商品名Synercid)則可以解決這一問題，它是第一個上市的鏈陽性菌素注射劑。

普那霉素的具體結構式如下：

雖然普那霉素具有廣泛的應用，且其制劑成品已經上市，但普那霉素較低的發酵產量和較高的生產成本，仍然是限制其應用的和發展的主要因素。

發明內容

本發明為解決現有技術中普那霉素產量低、生產成本高的問題，提供了一種提高普那霉素產量的發酵方法，所述方法包括：

在發酵培養過程中，向發酵培養基中補加正丙醇。

優選的，所述補加的時間為發酵培養開始后的10-60h，優選10-50h，更優選20-50h，最優選30-40h。

優選的，所述補加正丙醇采用連續補加的方式，補加速率為發酵培養基初始體積的0.04-0.1％/天，優選0.06-0.08％/天。

優選的，所述發酵培養基包含：2-10g/100mL碳源，2-5g/100mL氮源，0.2-1.0g/100mL無機鹽。

優選的，所述發酵培養基的碳源選自葡萄糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、麥芽糊精、可溶性淀粉、山梨醇、甘油之一或者上述物質的組合，優選可溶性淀粉、葡萄糖和蔗糖的組合。

優選的，所述發酵培養基的氮源選自黃豆餅粉、酵母粉、玉米蛋白粉、棉籽餅粉、花生餅粉、大豆粉、玉米漿干粉、酵母抽提物、蛋白胨之一或者上述物質的組合，優選黃豆餅粉和酵母粉的組合。

優選的，所述發酵培養基包含：可溶性淀粉3.0±0.6，葡萄糖2.0±0.4，蔗糖0.5±0.1，黃豆餅粉2.0±0.4，酵母粉0.5±0.1，硫酸銨0.2±0.04，硫酸錳0.1±0.02，硫酸亞鐵0.01±0.002，磷酸二氫鉀0.05±0.01，碳酸鈣0.3±0.06，單位為g/100mL，pH＝7.0±0.2。

優選的，所述發酵培養的時間為80-160h，優選100-160h。

優選的，所述發酵培養的條件為：溫度27±1.0℃，通氣量0.5-1.0VVM，罐壓0.045-0.065MPa，溶氧30-100％。

本發明通過流加葡萄糖溶液的方式，將葡萄糖含量控制在0.2-1.0％(葡萄糖在實時發酵培養基中的含量，單位為g/mL)。葡萄糖溶液的濃度為50％(g/mL)，121.0-123.0℃滅菌30min后使用，發酵過程中當培養基中葡萄糖的含量低于1.0％時開始流加。