[發明專利]lncRNACACF吸附miR-520b-3p在調控人臍靜脈內皮細胞周期中的應用

有效

• 申請號: 202210582507.7
• 申請日: 2022-05-26
• 公開（公告）號: CN114958849B
• 公開（公告）日: 2023-10-27
• 發明（設計）人: 張豪;白國鋒;王希龍;廖偉莉;潘金春;袁曉龍
• 申請（專利權）人: 華南農業大學;廣東省實驗動物監測所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85;C12N5/10;C12Q1/02;C12Q1/66;C12Q1/6888;C12Q1/6851;G01N15/14;G01N1/30
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 張珍

1.lncRNA CACF在調控人臍靜脈內皮細胞周期中的應用，其特征在于：體外環境下，lncRNA CACF正調控人臍靜脈內皮細胞周期進程；通過調節lncRNA CACF的表達水平，可實現人臍靜脈內皮細胞周期進程調控；所述的lncRNA CACF如SEQID NO：1所示。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：增加外源性lncRNA CACF，S期和G2期細胞占比增加，人臍靜脈內皮細胞周期進程加快；抑制lncRNA CACF的表達，細胞周期阻滯在G1期，人臍靜脈內皮細胞周期進程阻滯。

3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于：

所述的lncRNA CACF通過競爭性吸附miR-520b-3p，實現人臍靜脈內皮細胞周期進程調控。

4.miR-520b-3p在調控人臍靜脈內皮細胞周期中的應用，其特征在于：體外環境下，miR-520b-3p負調控人臍靜脈內皮細胞周期進程；通過調節miR-520b-3p的表達水平，可實現人臍靜脈內皮細胞周期進程調控。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于：增加外源性miR-520b-3p，細胞周期阻滯在G1期，人臍靜脈內皮細胞周期進程阻滯；抑制miR-520b-3p表達，G1期細胞占比降低，人臍靜脈內皮細胞周期進程加快。

6.lncRNA CACF吸附miR-520b-3p在調控人臍靜脈內皮細胞周期中的應用，其特征在于：體外環境下，由增加外源性LncRNA CACF引起的人臍靜脈內皮細胞周期進程的功能表型，能在增加外源性miR-520b-3p后回復。

7.根據權利要求2、3、5任一項所述的應用，其特征在于：

所述的增加外源性lncRNA CACF通過基因過表達技術實現，采用的基因過表達載體通過如下方式制備得到：

(1)提取人臍靜脈內皮細胞的RNA，將其逆轉錄成cDNA，以cDNA為模板進行PCR擴增，得到目的片段；

(2)將目的片段連接到用限制性內切酶BamH I和Xba I酶切后的pcDNA3.1載體上，得到重組載體。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：

步驟(1)中進行PCR擴增所用引物如下所示：

PCR-CACF Forward：5′-GGGGTACCCCTCACGGAAAGGGGCGG-3′；

PCR-CACF Reverse：5′-GGAATTCGCCCGGCATGGGGGAC-3′。

9.根據權利要求2、3、5任一項所述的應用，其特征在于：

所述的抑制lncRNA CACF表達降低通過反義寡核苷酸實現，反義寡核苷酸序列如下：

5′-CGAAUCCACUUUCGCUUCUGAGAUUCACCGGCCUCACACUACCAAAUAGGAGAAAGUAAUCUGUGCAUUUCUUUCGCGUCUGAGAUUCACCGGCCUCCCUGGGCAGACAUUACCUGATT-3′。

10.根據權利要求2、3、5任一項所述的應用，其特征在于：

所述的增加外源性miR-520b-3p通過miR-520b-3p模擬物實現，采用的miR-520b-3pmimic的序列如下：

5′-AAAGUGCUUCCUUUUAGAGGG-3′；

所述的抑制miR-520b-3p表達降低通過miR-520b-3p核酸抑制物實現，采用的miR-520b-3p inhibitor的序列如下：

5′-CCCUCUAAAAGGAAGCACUUU-3′。