[發(fā)明專利]一種檢測(cè)食品中生物毒素適配體傳感器的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210568603.6
• 申請(qǐng)日: 2022-05-24
• 公開（公告）號(hào): CN114894872A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 袁亮;王曉青;張偉彬;趙耀東;喬梅;袁晨翔;董紅霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院;商丘醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校
• 主分類號(hào): G01N27/327
• 分類號(hào): G01N27/327;G01N27/38
• 代理公司: 南京智造力知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32382
• 代理人: 陳佳佳

本發(fā)明屬于食品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種檢測(cè)食品中生物毒素適配體傳感器的制備方法；步驟為：將GO溶液和NH₂?Ru@SiO₂溶液分別先滴加至雙通道絲網(wǎng)印刷電極，其可避免化學(xué)結(jié)合中材料損耗、并提高適配體傳感器的穩(wěn)定性；再以AFB1適配體、OTA適配體分別與AuNPs的混合溶液修飾不同的電極；最后將Fc?apt和MB?apt滴加在電極表面制備傳感器；根據(jù)電流值與標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度建立檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線；通過檢測(cè)樣品液的二茂鐵和亞甲基藍(lán)的峰電流值，實(shí)現(xiàn)樣品中毒素的檢測(cè)；本發(fā)明使用了GO溶液可與AuNPs的結(jié)合呈現(xiàn)出優(yōu)良的導(dǎo)電性和優(yōu)越的生物相容性；能夠?qū)崿F(xiàn)多種生物毒素的同時(shí)檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便、具有高靈敏度和高選擇性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)食品中生物毒素適配體傳感器的制備方法。

背景技術(shù)

生物毒素是由各種生物(動(dòng)物、植物、微生物)產(chǎn)生的有毒物質(zhì)；食品中的生物毒素主要是真菌毒素，真菌毒素是真菌在生長(zhǎng)過程所產(chǎn)生的次級(jí)代謝物，對(duì)人類和動(dòng)物具有毒害作用。在食品的的貯藏過程中，由于環(huán)境因素的影響，往往容易受到各種真菌的污染，因此，食品及其衍生物中存在霉菌毒素共存的可能性很高。黃曲霉毒素和赭曲霉毒素是常見的生物毒素，可通過受污染的食物和動(dòng)物飼料進(jìn)入食物鏈，對(duì)人類健康產(chǎn)生嚴(yán)重危害。黃曲霉毒素主要是黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的二級(jí)代謝產(chǎn)物，是一種毒性極強(qiáng)的真菌毒素。黃曲霉毒素主要對(duì)肝臟組織具有破壞作用，嚴(yán)重會(huì)導(dǎo)致肝癌甚至死亡。在污染食品的黃曲霉毒素中以黃曲霉毒素B1(AFB1)最常見，毒性和致癌性也最強(qiáng)。赭曲霉毒素是由多種曲霉菌和青霉菌產(chǎn)生的化合物；赭曲霉毒素類型包括赭曲霉毒素A(OTA)，赭曲霉毒素B，赭曲霉毒素C和赭曲霉毒素D，其中毒性最大、分布最廣、產(chǎn)毒量最高、對(duì)農(nóng)產(chǎn)品的污染最重、與人類健康關(guān)系最密切的是赭曲霉毒素A。目前有較多的研究報(bào)道OTA與AFB1共存的潛在風(fēng)險(xiǎn)可能由于累積或協(xié)同作用而導(dǎo)致更大的毒性，并且OTA與AFB1具有協(xié)同的細(xì)胞毒性作用，對(duì)公眾健康造成巨大威脅。

真菌毒素的檢測(cè)方法主要有氣相色譜、高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。盡管這些方法可以實(shí)現(xiàn)真菌毒素的檢測(cè)，但需要昂貴的儀器，專業(yè)的操作人員和復(fù)雜的檢測(cè)程序，且耗時(shí)長(zhǎng)，難以滿足現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的需要。電化學(xué)技術(shù)具有高靈敏度、易操作、低成本等優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)被用于真菌毒素的檢測(cè)。目前，針對(duì)單一真菌毒素的電化學(xué)適配體傳感器已經(jīng)具有良好靈敏度和選擇性，但其檢測(cè)精準(zhǔn)度還有待進(jìn)一步提高。因此，需要發(fā)展有效的檢測(cè)技術(shù)來實(shí)現(xiàn)食品中毒素快速、有效的檢測(cè)分析。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供一種用于食品安全領(lǐng)域中生物毒素的檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)生物毒素的高靈敏、高精準(zhǔn)同時(shí)檢測(cè)；其中二茂鐵(Fc)標(biāo)記的AFB1適配體互補(bǔ)鏈，記為Fc-apt；亞甲藍(lán)(MB)標(biāo)記的OTA適配體互補(bǔ)鏈，記為MB-apt。

一種檢測(cè)食品中生物毒素適配體傳感器的制備方法，包括以下步驟：

(1)合成AuNPs溶液；

將HAuCl₄·3H₂O溶液溶于超純水中，攪拌溶解得到混合溶液；然后將混合溶液在一定溫度下加熱至沸騰后，加入檸檬酸鈉溶液，靜置冷卻至室溫，得到AuNPs溶液；

(2)合成NH₂-Ru@SiO₂溶液；

將曲拉通X-100、環(huán)己烷、1-己醇和水混合后加入羧基三聯(lián)吡啶釕是三(2,2'-聯(lián)吡啶基) 二氯釕(II)六水合物(Ru(bpy)₃²⁺)溶液，并攪拌一段時(shí)間后，加入正硅酸四乙酯和氨水引發(fā)聚合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，加入丙酮使得納米顆粒沉淀，然后再分別用乙醇和超純水洗滌離心，離心后的產(chǎn)物經(jīng)烘干后得到干燥產(chǎn)物，記為Ru@SiO₂；