[發(fā)明專利]一種檢測(cè)食品中生物毒素適配體傳感器的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210568603.6
• 申請(qǐng)日: 2022-05-24
• 公開（公告）號(hào): CN114894872A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 袁亮;王曉青;張偉彬;趙耀東;喬梅;袁晨翔;董紅霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院;商丘醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校
• 主分類號(hào): G01N27/327
• 分類號(hào): G01N27/327;G01N27/38
• 代理公司: 南京智造力知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32382
• 代理人: 陳佳佳

1.一種檢測(cè)食品中生物毒素傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)合成AuNPs溶液；

將HAuCl₄·3H₂O溶液溶于超純水中，攪拌溶解得到混合溶液；然后將混合溶液在一定溫度下加熱至沸騰后，加入檸檬酸鈉溶液，靜置冷卻至室溫，得到AuNPs溶液；

(2)合成NH₂-Ru@SiO₂溶液；

將曲拉通X-100、環(huán)己烷、1-己醇和水混合后加入羧基三聯(lián)吡啶釕是三(2,2'-聯(lián)吡啶基)二氯釕(II)六水合物溶液，并攪拌一段時(shí)間后，加入正硅酸四乙酯和氨水引發(fā)聚合反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，加入丙酮使得納米顆粒沉淀，然后再分別用乙醇和超純水洗滌離心，離心后的產(chǎn)物經(jīng)烘干后得到干燥產(chǎn)物，記為Ru@SiO₂；

隨后將Ru@SiO₂用乙醇溶解，得到Ru@SiO₂溶液；然后在Ru@SiO₂溶液中加入3-氨丙基三乙氧基硅烷攪拌反應(yīng)后，用乙醇洗滌離心后并烘干，得到粉末狀的氨基功能化的Ru@SiO₂，記為NH₂-Ru@SiO₂；最后，將NH₂-Ru@SiO₂溶解在超純水中，得到NH₂-Ru@SiO₂溶液；

(3)將雙通道絲網(wǎng)印刷電極依次在乙醇和水中進(jìn)行超聲清洗；清洗后在硫酸溶液中使用循環(huán)伏安對(duì)電極進(jìn)行電化學(xué)清洗；清洗完成后在雙通道絲網(wǎng)印刷電極的兩個(gè)工作電極表面首先滴加氧化石墨烯溶液，在室溫條件下孵育；孵育完成后在兩個(gè)工作電極表面再滴加步驟(2)合成的NH₂-Ru@SiO₂溶液，再次孵育后得到的電極記為雙通道絲網(wǎng)印刷電極A；

(4)取三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽(TCEP)溶液與AFB1適配體溶液混合反應(yīng)得到AFB1混合液；靜置一段時(shí)間后再加入步驟(1)制備的AuNPs溶液，得到混合溶液B；

取三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽溶液與OTA適配體溶液混合反應(yīng)得到OTA混合液；靜置一段時(shí)間后再加入步驟(1)制備的AuNPs溶液，得到混合溶液C；

(5)取步驟(3)得到的雙通道絲網(wǎng)印刷電極A，兩個(gè)通道分別記為通道一和通道二；取步驟(4)中的混合溶液B滴加在雙通道絲網(wǎng)印刷電極通道一的工作電極表面；再取步驟(4)中的混合溶液C滴加在雙通道絲網(wǎng)印刷電極通道二的工作電極表面進(jìn)行第一次孵育，孵育后，使用Tris-HCl緩沖溶液沖洗工作電極表面，沖洗后分別在兩個(gè)通道的工作電極表面滴涂巰基己醇溶液進(jìn)行第二次孵育，孵育后再用Tris-HCl緩沖溶液沖洗工作電極表面，沖洗后得到的電極記為雙通道絲網(wǎng)印刷電極B；

(6)首先將Fc-apt修飾在步驟(5)中得到的雙通道絲網(wǎng)印刷電極B的兩個(gè)工作電極表面進(jìn)行第一次孵育；然后繼續(xù)在電極表面修飾MB-apt進(jìn)行第二次孵育，孵育完成后得到適配體傳感器；

(7)將AFB1和OTA加入Tris-HCl緩沖溶液中，配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液；取若干個(gè)步驟(6)制備的適配體傳感器在其工作電極表面滴加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，傳感器與標(biāo)準(zhǔn)溶液是一一對(duì)應(yīng)關(guān)系；滴加后進(jìn)行孵育，待孵育后，通過差分脈沖伏安法記錄OTA適配體互補(bǔ)鏈所修飾的亞甲基藍(lán)和AFB1適配體互補(bǔ)鏈所修飾的二茂鐵的電信號(hào)；依據(jù)伏安圖譜中二茂鐵的峰電流值與AFB1濃度的關(guān)系、以及亞甲基藍(lán)的峰電流值與OTA濃度的關(guān)系，分別建立AFB1和OTA的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；

(8)樣品檢測(cè)：首先獲取樣品待測(cè)液；然后將樣品待測(cè)液滴加在步驟(6)所制備的適配體傳感器表面進(jìn)行孵育，孵育后，通過差分脈沖伏安法記錄OTA適配體互補(bǔ)鏈所修飾的亞甲基藍(lán)和AFB1適配體互補(bǔ)鏈所修飾的二茂鐵的電信號(hào)；獲得樣品待測(cè)液的伏安曲線，將二茂鐵和亞甲基藍(lán)的峰電流值代入步驟(6)所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，即可實(shí)現(xiàn)樣品中AFB1和OTA的檢測(cè)。