[發明專利]動脈粥樣硬化斑塊的免疫細胞治療劑及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202210568468.5
• 申請日: 2022-05-23
• 公開（公告）號: CN114870028A
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發明（設計）人: 劉非拉;夏青
• 申請（專利權）人: 重慶理工大學
• 主分類號: A61K47/64
• 分類號: A61K47/64;A61K31/713;C07K14/705;C07K1/107;A61P9/10
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 魏志恒

1.一種動脈粥樣硬化斑塊的免疫細胞治療劑，其特征在于，所述免疫細胞治療劑以單核巨噬細胞為基礎，以“膜修飾材料”CD47p、納米輔助中間載體GQDs以及基因藥物miRNA223交聯而成的體系CD47p-GQDs-miRNA223為工具，利用細胞表面納米工程化技術構建得到的M-CD47p-GQDs-miRNA223；

所述CD47p為具有CD47 IgV結構域的衍生肽；所述GQDs為氨基化的石墨烯量子點。

2.根據權利要求1所述的免疫細胞治療劑，其特征在于，所述CD47p的序列為P-GK^DL^DE^DI^DV^DT^DK^DGE^D R^DS^DL^D E^DT^D V^DE^DC^DT^DY^DN^DG；其中，P為棕櫚酸。

3.根據權利要求1所述的免疫細胞治療劑，其特征在于，所述CD47p用Rhodamine B進行熒光修飾，所述miRNA223為5’巰基修飾同時3’FAM熒光修飾。

4.根據權利要求1-3任一所述的免疫細胞治療劑，其特征在于，所述單核巨噬細胞為RAW264.7。

5.權利要求1-5任一所述動脈粥樣硬化斑塊的免疫細胞治療劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺、N-羥基丁二酰亞胺依次加入已溶解的CD47p溶液中，調節pH至6.0后室溫攪拌30min，得到羧基活化的CD47p溶液，記為溶液A；

(2)向溶液A中加入已調節pH7.44的氨基化GQDs溶液，室溫下攪拌24h，透析，得到CD47p-GQDs交聯溶液，再向交聯溶液中加入6-(3'-(2-吡啶基二硫代)丙酰氨基)已酸酯，并在室溫下攪拌反應1h，超濾離心后得到CD47p-GQDs-S-S-溶液，記為溶液C；

(3)取巰基化miRNA223溶液添加到溶液C稀釋液中，置于4℃冰箱并且保持避光反應一夜，得到CD47p-GQDs-miRNA223溶液，記為溶液D；

(4)將溶液D與RAW264.7單核巨噬細胞共孵育，得到動脈粥樣硬化斑塊的免疫細胞治療劑M-CD47p-GQDs-miRNA223；

所述室溫為20～25℃。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述CD47p溶液濃度為1mg/mL，且所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺、所述N-羥基丁二酰亞胺與所述CD47p的質量比為2：1：20。

7.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述氨基化GQDs溶液濃度為0.1mg/mL，且所述氨基化GQDs溶液與所述溶液A的體積比為1:1；

步驟(2)所述6-(3'-(2-吡啶基二硫代)丙酰氨基)已酸酯的添加量為2.5mg。

8.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述透析的截留分子量為1kDa，所述超濾離心的截留分子量為100kDa。

9.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述巰基化miRNA223溶液的濃度為20μM，所述溶液C稀釋液稀釋倍數為10倍，且巰基化miRNA223溶液與所述溶液C稀釋液的體積比為1：50。

10.權利要求1-4任意所述免疫細胞治療劑或權利要求5-9任一所述制備方法制備的產品在制備動脈粥樣硬化斑塊的免疫細胞治療劑藥品中的應用。