[發明專利]一種用于檢測半胱氨酸的(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針及其制備方法

在審

• 申請號: 202210567064.4
• 申請日: 2022-05-23
• 公開（公告）號: CN114835698A
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 王石發;秦阿慧;鞏帥;張燕;王忠龍;李明新;楊益琴;徐徐
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C07D407/04
• 分類號: C07D407/04;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 南京智轉慧移知識產權代理有限公司 32649
• 代理人: 王偉

1.一種用于檢測半胱氨酸的(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針，其特征在于，結構式為：

2.權利要求1所述的用于檢測半胱氨酸的(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)以4-溴-2-羥基苯乙酮為原料，與4-(二苯氨基)苯硼酸進行偶聯反應，得到4-(二苯氨基)苯基-2-羥基苯乙酮；

2)4-(二苯氨基)苯基-2-羥基苯乙酮與糠醛進行縮合環化反應，得到6-(4-(二苯胺基)苯基)-2-(呋喃-2-基)-3-羥基色原酮；

3)6-(4-(二苯胺基)苯基)-2-(呋喃-2-基)-3-羥基色原酮與丙烯酰氯進行酯化反應，得到6-(4-(二苯胺基)苯基)-2-(呋喃-2-基)-3-羥基色原酮丙烯酸酯。

3.根據權利要求2所述的用于檢測半胱氨酸的(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟1)的制備方法為：

(1)將10mmol 4-溴-2-羥基苯乙酮、12mmol 4-(二苯氨基)苯硼酸、40mmol碳酸鈉和1mmol四(三苯基膦)鈀依次加入到干燥的三口燒瓶中，再加入50mL二氧六環和15mL水溶解如上固體，在氮氣條件下加熱到90℃反應10～12h，用TLC法跟蹤監測，至反應完全后停止反應；

(2)反應液經減壓蒸餾除去二氧六環和水后再加入乙酸乙酯，用飽和食鹽水進行洗滌至中性，有機相再經無水硫酸鈉干燥、過濾、濃縮后得到4-(二苯氨基)苯基-2-羥基苯乙酮粗產物；

(3)4-(二苯氨基)苯基-2-羥基苯乙酮粗產物經硅膠柱分離(乙酸乙酯/石油醚＝1/20v/v)，得到4-(二苯氨基)苯基-2-羥基苯乙酮。

4.根據權利要求2所述的用于檢測半胱氨酸的(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟2)的具體制備方法為：

(1)在0℃下將5mmol 4-(二苯氨基)苯基-2-羥基苯乙酮、5mmol糠醛、10mmol氫氧化鈉、50mL乙醇依次加入干燥的三口燒瓶中，在室溫下反應8～10h；

(2)將反應混合物倒入冰水中，用稀鹽酸酸化，過濾洗滌得到黃色固體沉淀物。再將上述黃色固體、10mL乙醇和5mL 20％的NaOH水溶液依次加入干燥的三口燒瓶中，在0℃下滴加5mL 30％H₂O₂，在室溫下反應5～6h。

(3)反應液倒入冰水中，用稀鹽酸中和，過濾得到6-(4-(二苯胺基)苯基)-2-(呋喃-2-基)-3-羥基色原酮粗產物，然后用冷乙醇重結晶，得到6-(4-(二苯胺基)苯基)-2-(呋喃-2-基)-3-羥基色原酮。

5.根據權利要求2所述的用于檢測半胱氨酸的(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟3)的制備方法具體為：

(1)將1mmol 6-(4-(二苯胺基)苯基)-2-(呋喃-2-基)-3-羥基色原酮、2mmol丙烯酰氯、2mmol三乙胺，10～20mL二氯甲烷依次加入干燥的三口燒瓶中，在室溫下反應10～12h；

(2)反應液用飽和食鹽水進行洗滌至中性，有機相經無水硫酸鈉干燥、過濾、濃縮后得到6-(4-(二苯胺基)苯基)-2-(呋喃-2-基)-3-羥基色原酮丙烯酸酯粗產物；

(3)6-(4-(二苯胺基)苯基)-2-(呋喃-2-基)-3-羥基色原酮丙烯酸酯粗產物經硅膠柱分離(乙酸乙酯/石油醚＝1/5，v/v)，得到6-(4-(二苯胺基)苯基)-2-(呋喃-2-基)-3-羥基色原酮丙烯酸酯。

6.權利要求1所述的用于檢測半胱氨酸的(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針在檢測半胱氨酸中的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針在室溫下能迅速、專一地與半胱氨酸發生反應，溶液由無色變成橙紅色熒光。