[發明專利]一種用于檢測半胱氨酸的(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針及其制備方法

在審

• 申請號: 202210567064.4
• 申請日: 2022-05-23
• 公開（公告）號: CN114835698A
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 王石發;秦阿慧;鞏帥;張燕;王忠龍;李明新;楊益琴;徐徐
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C07D407/04
• 分類號: C07D407/04;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 南京智轉慧移知識產權代理有限公司 32649
• 代理人: 王偉

本發明公開了一種用于檢測半胱氨酸的(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針及其制備方法。本發明利用4?溴?2?羥基苯乙酮為原料，與4?(二苯氨基)苯硼酸進行偶聯反應，得到4?(二苯氨基)苯基?2?羥基苯乙酮，再與糠醛進行羥醛縮合和環化反應，得到6?(4?(二苯胺基)苯基)?2?(呋喃?2?基)?3?羥基色原酮；再與丙烯酰氯進行酯化反應，得到6?(4?(二苯胺基)苯基)?2?(呋喃?2?基)?3?羥基色原酮丙烯酸酯。該化合物在室溫下能迅速、專一地與半胱氨酸發生反應，使得溶液熒光顏色由無色變為橙紅色，最低檢測限為9.76×10^?8M。該探針可作為檢測半胱氨酸用熒光探針，并具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬精細有機合成技術領域，涉及一種用于檢測半胱氨酸的(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針及其制備方法。

背景技術

半胱氨酸(Cys)、同型半胱氨酸(Hcy)和谷胱甘肽(GSH)是主要的含硫醇的氨基酸，在許多生物過程中扮演著重要的角色。其中，Cys與許多重要的細胞功能直接相關，如抗氧化防御、細胞生長、解毒和代謝等等。因此，細胞中Cys水平的異常也與各種疾病有關。Cys缺乏可導致生長速度緩慢、造血減少、皮膚損傷、頭發脫色、體重比降低、血漿白蛋白水平、白細胞減少、肝臟損傷和帕金森病；相反，過量的Cys可能導致嚴重的神經毒性、阿爾茨海默病和心血管疾病。因此開發有效的方法用于監測半胱氨酸濃度的變化具有重要的意義。

已經報道的檢測半胱氨酸的方法有很多，主要包括高效液相色譜法、原子吸收光譜法、氣相色譜法、亞甲基藍法和電化學分析等，但這些方法存在樣品預處理復雜、設備昂貴、操作繁瑣、檢測耗時長，具有一定的局限性。相比之下，熒光探針可以作為一種簡單有效的檢測Cys方法，具有非侵入性、高靈敏度和高選擇性等優點，并可實時成像于活細胞。其中有機小分子熒光探針具有體積小、合成簡單、反應時間快、選擇性好、靈敏度高、以熒光為輸出信號便于實時檢測等特點，近年來成為檢測半胱氨酸的一種重要方法。

發明內容

針對現有技術中存在的不足，本發明所要解決的技術問題是提供一種(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針，滿足檢測半胱氨酸的使用需求。本發明所要解決的另一技術問題是提供一種上述(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針的制備方法。本發明還要解決的一個技術問題是是提供一種上述(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針的應用。

為實現解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：

用于檢測半胱氨酸的(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針，為6-(4-(二苯胺基)苯基)-2-(呋喃-2-基)-3-羥基色原酮丙烯酸酯，其結構式為：

所述的用于檢測半胱氨酸的(二苯氨基)苯基黃酮類熒光探針的制備方法，包括如下工藝步驟：

1)以4-溴-2-羥基苯乙酮為原料，與4-(二苯氨基)苯硼酸進行偶聯反應，得到4-(二苯氨基)苯基-2-羥基苯乙酮；

2)4-(二苯氨基)苯基-2-羥基苯乙酮與糠醛進行縮合環化反應，得到6-(4-(二苯胺基)苯基)-2-(呋喃-2-基)-3-羥基色原酮；

3)6-(4-(二苯胺基)苯基)-2-(呋喃-2-基)-3-羥基色原酮與丙烯酰氯進行酯化反應，得到6-(4-(二苯胺基)苯基)-2-(呋喃-2-基)-3-羥基色原酮丙烯酸酯。

步驟1)中，4-溴-2-羥基苯乙酮為原料，與4-(二苯氨基)苯硼酸進行偶聯反應，得到4-(二苯氨基)苯基-2-羥基苯乙酮，具體的制備步驟包括：

(1)將10mmol 4-溴-2-羥基苯乙酮、12mmol 4-(二苯氨基)苯硼酸、40mmol碳酸鈉和1mmol四(三苯基膦)鈀依次加入到干燥的三口燒瓶中，再加入50mL二氧六環和15mL水溶解如上固體，在氮氣條件下加熱到90℃反應過夜，用TLC法跟蹤監測，至反應完全后停止反應；