[發明專利]青霉菌W21C371及其在制備彎孢霉菌素中的應用

有效

• 申請號: 202210564272.9
• 申請日: 2022-05-23
• 公開（公告）號: CN115044483B
• 公開（公告）日: 2023-09-05
• 發明（設計）人: 王鴻;范曄;應優敏;陳建偉;章華偉;魏斌;俞琰壘
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P17/08;C07D313/00;C12R1/80
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 李世玉

1.青霉菌(Penicillium?sp.)W21C371，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2022年1月13日，保藏編號為CCTCC?NO：M?2022063，地址為中國，武漢，武漢大學。

2.一種權利要求1所述的青霉菌W21C371在發酵制備彎孢霉菌素中的應用。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述彎孢霉菌素按如下步驟制備：(1)將青霉菌W21C371接種至大米固體培養基，在20-30℃條件下暗培養15-30天，獲得大米發酵產物；所述大米固體培養基為大米和蒸餾水的混合物，其中蒸餾水用量以大米質量計為1-5mL/g；(2)將大米發酵產物中加入有機溶劑，室溫浸提，提取液濃縮至無液體流出，獲得粗提物浸膏；(3)將步驟(2)粗提物浸膏用水懸浮，以有機溶劑萃取，收集有機相，減壓濃縮至干，得到萃取物浸膏；(4)將步驟(3)萃取物浸膏用甲醇溶解后進行MCI?CHP20P柱層析，以體積濃度20-100％甲醇-水為洗脫液，收集體積濃度70％的甲醇-水洗脫部位，減壓濃縮至干，得濃縮物；(5)將步驟(4)所得濃縮物用甲醇溶解后進行硅膠柱層析，以體積比為50:1、40:1、30:1的二氯甲烷-甲醇混合溶劑進行梯度洗脫，收集體積比40:1的二氯甲烷-甲醇洗脫部位，減壓濃縮至干，即得到式(Ⅰ)所示彎孢霉菌素；

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟(1)所述青霉菌W21C371接種至大米固體培養基前，先進行活化培養，再將活化后的菌懸液以體積濃度0.1-1％的接種量接種大米固體培養基，所述活化是指將青霉菌W21C371接種至PDA培養基，28℃培養，使菌株活化，將活化后的菌株用體積濃度2％吐溫80無菌水重懸，得到菌懸液。

5.如權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟(1)中發酵培養條件為：28℃條件下暗培養20天。

6.如權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟(2)中所述有機溶劑為95％乙醇、甲醇或丙酮；所述有機溶劑體積用量以大米固體培養基中大米干重計為2-8mL/g。

7.如權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟(2)所述浸提至少進行3次，每次提取時間為3～5天。

8.如權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟(3)中所述水體積用量以粗提物浸膏重量計為2-5mL/g；所述有機溶劑為乙酸乙酯，所述有機溶劑與水的體積比為1:0.5-3；萃取3-5次。

9.如權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟(4)方法為：萃取物浸膏以甲醇溶解后進行MCI?CHP20P柱層析，依次以體積比為20:80、30:70、40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10和100:0的甲醇/水混合溶劑為洗脫劑進行梯度洗脫，每一梯度洗脫2～5個柱體積，流速10-20mL/min；收集體積比70:30的甲醇-水洗脫部位，減壓濃縮至干，得濃縮物。

10.如權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟(5)方法為：將步驟(4)所得濃縮物用甲醇溶解后進行硅膠柱層析，依次以體積比為50:1、40:1、30:1的二氯甲烷-甲醇混合溶劑為洗脫劑進行梯度洗脫，每一梯度洗脫2～5個柱體積，流速10-20mL/min；收集體積比40:1的二氯甲烷-甲醇洗脫部位，減壓濃縮至干，即得彎孢霉菌素。